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主题：【原创】（新更新）对LC的认识（12）

浏览0 回复29 电梯直达
xue2009
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发表于：2010/10/24 12:31:17 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    在论坛上已经写了不少关于对LC的认识了，事实上我一直追求的是用最通俗的语言表达我的认识，因为硬生生的理论谁看了都讨厌，所以我尽量把理论都转化成我自己的话。希望大家多多指正。
    事实上我是很反感照着药典或者什么资料完成自己的实验的，这可能与在实验室、毕竟不是检测机构的环境有关。但我想说的是必须得有自己的想法，因为你在实验中出现的问题谁也无法预料，我认为参考资料并加以自己的想法才是王道，药典是怎么来的？还不是人制定的，谁敢说那些制定药典的人水平能比我们高多少？对吧。
    就像拿到一个物质，或者一个盲样我们完全可以按照自己的想法进行实验。如果这个物质的结构式我们已经知晓，就完全可以判断它PKA值，疏水性，溶解性等一些有用的信息，假如它的分子量大于2000，一般选择用凝胶色谱；假如它分子量比较大，疏水性基团较多，那流动相完全可以用有机相和水就搞定了；如果它在水中会解离，那一般是要加入缓冲盐的。很多人认为磷酸盐不好，我承认书上有理论是证明过它伤柱子，但我们仍然要用它，这个我已经解释过很多遍了，所以可以不用，但如果发现用其他的缓冲盐效果不好（像基线不稳，基线漂移），那么磷酸盐还得用，这就是实际实验中的问题，所以要灵活变通。如果目标物质的结构式不知晓，那完全可以根据它溶于水或有机溶剂来判断它极性的大小或疏水性的大小，也可以测出它在水中的PH值等等，掌握了更多的信息后我们完全可以进行实验，并且可以制定一套完整的分析方案，这里一些很简单的判断方式是要掌握的；例如目标组分在酸性条件下出峰慢而在碱性条件下出峰快那么它一般是有机酸，相反则是有机碱等等。
    再比如梯度洗脱，记住最重要的原则就是保证分离度兼顾分离时间就行啦，像一般强保留的组分都是要走到100%的有机相的，所以先用100%有机相走个等度，看最后一个出峰的时间，那个时间就是走梯度的最大时间（初步认为，可以再调），然后保证第一个物质在3-5分钟出峰就行，至于怎么调都行，包括改变梯度陡度，等度梯度混用都行。所以不要拘泥于形式，多思考，你就会认识得更深刻，做LC的过程也就是个积累的过程，想想那些专家什么的也不过如此。当然这都是建立在具备强大的理论知识的前提下，肚子了没东西就没底气，所以大家也不能忽视理论的学习，万万不要觉得LC只是个实践的过程。
    最后，大家有什么问题尽管给我提出来，能解决的我会在第一时间给大家解决，谢谢大家指正。
   
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2010/10/24 12:45:21 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用100%有机相等度的话，东西不会都冲到一起去吗？
能看出来有多少峰吗？
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xue2009
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2010/10/24 12:50:07 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
用100%有机相等度的话，东西不会都冲到一起去吗？
能看出来有多少峰吗？

我是针对一般保留性极强的物质说的，这里也可以稍微调下的
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快乐
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2010/10/24 13:22:33 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
制定药典的都是些专家，在理论上或行政上会知道得多些，但实际操作，不敢苟同。
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xue2009
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2010/10/24 13:29:30 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 快乐(ynsfeed) 发表:
制定药典的都是些专家，在理论上或行政上会知道得多些，但实际操作，不敢苟同。

对的，要敢于在具备理论知识的指导下质疑一切才行。
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2010/10/24 19:55:02 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
用100%有机相等度的话，东西不会都冲到一起去吗？
能看出来有多少峰吗？

我是针对一般保留性极强的物质说的，这里也可以稍微调下的


保留性极强的意思是极性较小的物质吗？
如果是的话这样的物质适合用反相色谱柱分离吗？
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xue2009
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2010/10/24 20:10:47 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
用100%有机相等度的话，东西不会都冲到一起去吗？
能看出来有多少峰吗？

我是针对一般保留性极强的物质说的，这里也可以稍微调下的


保留性极强的意思是极性较小的物质吗？
如果是的话这样的物质适合用反相色谱柱分离吗？

也不尽是极性小，事实上疏水效应也是一个方面。这里我们需要注意，正相色谱和反相色谱不单单是根据极性的区分，有时只看物质适合正相分离还是反相分离，毕竟关于色谱保留的机理到现在还没人说的清楚，所以在实际运用中我们灵活选择就好。经验，定理都没有绝对的正确性，它仅仅只能给我们一个指导作用，如果按照它生搬硬套就不能很好的解决问题了。
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2010/10/24 20:13:14 Last edit by xue2009
ruby70303
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2010/10/25 22:00:26 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
xue2009有出新专辑了，进来学习一下，期待下步大作。
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ruby70303
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2010/10/25 22:03:18 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
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原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
用100%有机相等度的话，东西不会都冲到一起去吗？
能看出来有多少峰吗？

我是针对一般保留性极强的物质说的，这里也可以稍微调下的


保留性极强的意思是极性较小的物质吗？
如果是的话这样的物质适合用反相色谱柱分离吗？

也不尽是极性小，事实上疏水效应也是一个方面。这里我们需要注意，正相色谱和反相色谱不单单是根据极性的区分，有时只看物质适合正相分离还是反相分离，毕竟关于色谱保留的机理到现在还没人说的清楚，所以在实际运用中我们灵活选择就好。经验，定理都没有绝对的正确性，它仅仅只能给我们一个指导作用，如果按照它生搬硬套就不能很好的解决问题了。
xue2009确实厉害，解释的很到位，请问如果有个极性小的化合物，是先用正相色谱柱分析呢，还是先用反相色谱柱分析？
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littleaimar
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2010/10/25 22:10:44 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
能用反相尽量用反相，正相很麻烦的，而且要换这换那的
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xue2009
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2010/10/25 22:37:33 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 littleaimar(littleaimar) 发表:
能用反相尽量用反相，正相很麻烦的，而且要换这换那的

这个确实是这样，想想RPLC承担了有机化合物的75-80%，所以大部分以反相为主，说实话正相我接触的也不多，我认为不到万不得已正相我是不用的，呵呵
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