主题：【原创】分子克隆常用载体

DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆克隆，载体上常有筛选标记，如对抗菌素的抗性，某些基因产物的显色反应等。

一、质粒
常用的有pBR322，pUC系列质粒等。
（一）pBR322质粒是4362bp的环状双链DNA载体，有2个抗药性基因（四环素和氨苄青霉素），一个复制起始点和多个用于克隆的限制酶切点。当缺失抗药性基因的大肠杆菌被pBR322成功地转化时，它便从该质粒获得了抗生素抗性。两个抗生素基因中均含供插入外源DNA用的不同的单一酶切位点。一般只选一个抗生素基因作为插入外源DNA之用。外源DNA插入后该抗生素抗性失活。另一抗生素抗性基因则作为转化细菌后筛选阳性克隆之用。

（二）pUC系列质粒是2.7Kb的双链DNA质粒，有一个复制起点，一个氨苄青霉素抗性基因和一个多克隆位点，多克隆位点处于表达LacZ基因产物-β-半乳糖苷酶的氨基端片段，用pUC质粒转化LacZ基因有突变的大肠杆菌株（M15）时，因为由质粒表达的α－肽补充了大肠杆菌却失的α－肽，所以恢复了分解半乳糖的能力。在加入IPTG和X-gal的培养基上，长出蓝色克隆。如果在多克隆位点内插入外源DNA，由于它破坏了α－肽的表达，因而在加入IPTG和X－gal的培养基，不能长出蓝色克隆，这就是所谓的蓝白筛选。

二、单链丝状噬菌体和噬粒

（一）大肠杆菌丝状噬菌体包括M13噬菌体f噬菌体等，其基因组均是单链闭环DNA分子，其中M13mp系列克隆载体是对野生型M13加以改造，插入了多克隆位点和LacZ基因后的载体，所以也是可以利用IPTG和X-gal作蓝白筛选的，M13感染大肠杆菌后，即在菌体内酶的作用下，以感染性单链DNA（正链）为模板，转变为双链DNA，称作复制型DNA（RF DNA）。一般当每一个细胞内有100-200个RF DNA拷贝时，即停止复制，产生有感染性的完整的单链丝状噬菌体并分泌离开菌体。感染M13的大肠杆菌可继续生长，并不发生裂解，但生长速度则较正常菌慢，取感染M13的细菌培养液离心，即可从菌体中提取RF DNA，供限制酶切割等分子克隆操作之用；从离心后的上清液中，可用聚乙二醇（PEG）沉出噬菌体颗粒，提取单链DNA（ss DNA）供DNA序列分析，体外定位突变等使用。

（二）噬粒（phagemid）在质粒DNA中插入一段单链噬菌体的复制起始点DNA，即构成了噬粒，如pGEM-3Zf（-）就是一种噬粒。噬粒可像一般质粒一样操作，但当需要制备单链DNA时，就需要在培养时加入辅助噬菌体，常用的辅助噬菌体有M13KO7和R408。培养好的菌液在离心除去菌体后，上清中加入PEG即可沉出含有单链DNA的颗粒。噬粒也常用于DNA序列分析和体外定位突变。分子克隆常用载体除了上述两类以外，还有 噬菌体和粘粒，详细情况可参阅有关资料。
常用克隆质粒plasmid详细资料 编辑词条 发表评论(0)
常用的克隆质粒载体，包括：pQE30、pCNDA3、pCDNA3.1、pTYB1、KS等。
名称        大小        抗性        简介                   
PQE30        3461bp        Ap        T5lac启动子，加了6个His可采用chelating sepharose亲和层析纯化。        质粒
图谱        1. http://www1.qiagen.com/ literature/pqesequences/
pqe3x.pdf
2. http://allergy.dlearn.kmu.edu.tw/Protocol.Vectors/
Qiagen.pQE30_pqe3x.pdf
                                多克隆位点        http://www1.qiagen.com/literature/pqesequences/
pqe3x.pdf
                                载体基因序列        1. http://www.tcd.ie/Genetics/staff/Noel.Murphy/
recombinant%20dna%20ge4021/pqe30.doc
2. http://www1.qiagen.com/literature/pqesequences/
pqe-30w.txt
                                纯化
方法        http://www.biochain.com
pCNDA3        5446bp        Ap        T7启动子        质粒
图谱        http://depts.washington.edu/~bornlab/vector/map/
pcdna3-map.html
                                多克隆位点        http://depts.washington.edu/~bornlab/vector/map/
pcdna3-map.html
                                载体基因序列        1. http://seq.yeastgenome.org/vectordb/vector_
descrip/COMPLETE/PCDNA3.SEQ.html
2. http://www.genomex.com/vector_sequence/
pcDNA-3.txt
3. http://image.llnl.gov/image/dyn_html/bin/
full_seq.pl?vec=pCDNA3&seqno=45
pCDNA3.1        5446bp        Ap        T7启动子        质粒
图谱        1. http://www.genomex.com/vector_maps/
pcdna3.1+.pdf
2. https://www.invitrogen.com/content/sfs/
vectors/pcdna3.1+.pdf
                                多克隆位点        https://www.invitrogen.com/content/sfs/
vectors/pcdna3.1+_mcs.pdf
                                载体基因序列        1. http://seq.yeastgenome.org/vectordb/vector
_descrip/COMPLETE/PCDNA3.SEQ.html
2. http://www.genomex.com/vector_sequence/
pcDNA-3.txt
3. http://image.llnl.gov/image/dyn_html/bin/
full_seq.pl?vec=pCDNA3&seqno=45
                                载体内部酶切图谱        https://www.invitrogen.com/content/sfs/vectors/
pcdna3_1p_rest.pdf
PTYB1        7477bp        Ap        T7lac启动子        质粒
图谱        http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/
restriction_enzymes/maps/pTYB1_map.pdf
                                多克隆位点        http://www.neb.com/nebecomm/products/
productN6706.asp
                                载体基因序列        http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/
restriction_enzymes/sequences/ptyb1.txt
                                载体内部酶切图谱        http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/
restriction_enzymes/maps/pTYB1_map.pdf
                                纯化
方法        http://www.neb.com/nebecomm/manualFiles/
manualE6900.pdf#search=%22ptyb%20vector%22
PTYB2        7474 bp        Ap        T7lac启动子        质粒
图谱           
                                多克隆位点        http://www.neb.com/nebecomm/products/
productN6702.asp
                                载体基因序列        http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/
restriction_enzymes/sequences/ptyb2.txt
                                载体内部酶切图谱        http://www.neb.com/nebecomm/products/
productN6702.asp
                                纯化
方法        http://www.neb.com/nebecomm/manualFiles/
manualE6900.pdf#search=%22ptyb%20vector%2
PTYB3        7477bp        Ap        T7lac启动子        质粒
图谱         
                                多克隆位点        http://www.neb.com/nebecomm/products/
productN6703.asp
                                载体基因序列        http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/
restriction_enzymes/sequences/ptyb3.txt
                                载体内部酶切图谱        http://www.neb.com/nebecomm/products/
productN6703.asp
                                纯化
方法        http://www.neb.com/nebecomm/manualFiles/
manualE6900.pdf#search=%22ptyb%20vector%22
PTYB4        7474bp        Ap        T7lac启动子        质粒
图谱         
                                多克隆位点        http://www.neb.com/nebecomm/products/
productN6704.asp
                                载体基因序列        http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/
restriction_enzymes/sequences/ptyb4.txt
                                载体内部酶切图谱        http://www.neb.com/nebecomm/products/
productN6704.asp
                                纯化
方法          http://www.neb.com/nebecomm/manualFiles/
manualE6900.pdf#search=%22ptyb%20vector%22
KS        2961bp        Ap        T7lac启动子        质粒
图谱        1. http://www.fermentas.com/techinfo/nucleicacids/
mappbluescriptiiskks.htm
2. http://www.addgene.org/pgvec1f=d&cmd=genvecm
ap&vectorid=210&format=html&mtime=1143221230
                                多克隆位点        http://www.fermentas.com/techinfo/nucleicacids/
mappbluescriptiiskks.htm
                                载体基因序列        1. http://www.fermentas.com/techinfo/nucleicacids/
sequences/arbl2ksp.txt：KS（+）
2. http://www.fermentas.com/techinfo/nucleicacids/
sequences/arbl2ksm.txt：KS（-）
                                载体内部酶切谱        http://www.fermentas.com/techinfo/nucleicacids/
sitespbluescriptiiks.htm
pTrxFus        3585bp        Ap                  质粒
图谱        https://www.invitrogen.com/content/sfs/vectors/
ptrxfus.pdf
                                多克隆位点        https://www.invitrogen.com/content/sfs/vectors/
ptrxfus_rest.txt
                                载体基因列        https://www.invitrogen.com/content/sfs/vectors/
ptrxfus_seq.txt
                                载体内部酶切图谱        https://www.invitrogen.com/content/sfs/vectors/
ptrxfus_mcs.pdf
PinPoint Xa-1 T vector        3331bp        Ap        T7启动子；生物素标签        质粒
图谱        http://www.promega.com/figures/popup.asp?fn
=1118va
                                多克隆位点        http://www.promega.com/figures/popup.asp?
fn=1126ma
                                载体基因序列        http://www.promega.com/vectors/pinpnt1T.txt
                                纯化
方法          http://www.promega.com/tbs/tm028/tm028.