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主题：【原创】【第三次原创大赛】进样体积对安乃近有关物质检测的主峰柱效的影响

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雪妖
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发表于：2010/11/15 15:15:24 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被samanthalas设置为精华；
10版药典的推出，很多西药都新增了有关物质的检测，对我们厂家是很大的考验，也对我们色谱柱提出了更高的需求，在药典中大部分都规定了进样体积，不知道大家是不是严格按照进样体积来执行的，由于我工作的性质原因，我尽可能的按照药典检测，如果没有规定的，会考察一下进样量为20ul和5ul的情况下，柱效、分离度、峰形的变化程度，一般情况下，都没有什么太大的变化，不过也有特殊的情况，检测报告如下：

《中国国家药典2010版第二部》P286，安乃近片项下有关物质检测，按安乃近原料项下有关物质检测方法检测，报告如下：


安乃近片的测定



一．样品分子结构

中文名

英文名

分子结构

安乃近

Metamizole Sodium Tablets



二. 样品来源记录

样品测定描述：有关物质检测

生产厂家：市售

三. 液相方法条件

方法来源：《中国国家药典2010版第二部》P286；

具体方法：

色谱柱：Xtimate－C18，5um，4.6×250mm，或Xtimate－C18，5um，4.6×150mm；                                       

检测波长：254nm；                           

流动相：甲醇：磷酸盐缓冲溶液(磷酸二氢钠6.0g，加水1000ml，加三乙胺1ml，用NaOH溶液调节pH为7.0)=25：75；                                           

温度：室温23度；                                 

流速：1.0ml/min；                         

进样量：5ul； 

流动相的配制：

    1）磷酸盐缓冲溶液的配制：磷酸二氢钠6.0g，加水1000ml，加三乙胺1ml，用NaOH溶液调节pH为7.0；

2）准确量取甲醇125ml、、上述配置好的磷酸盐缓冲溶液375ml，摇匀后，超声脱气；

样品处理方法：

样品处理方法：将市售的安乃近片磨碎，混匀，精密称取0.1079g®至10ml容量瓶中，用甲醇并稀释至刻度，超声使其溶解摇匀即得；

备注：按药典要求，色谱图采集时间为主峰保留时间的3.5倍，共有两个杂质峰，色谱图如下。

四. 谱图及数据

1. Xtimate® C18，5um，4.6×250mm ：



Xtimate® C18，5um，4.6×150mm  色谱图：

    结论：按10版药典检测，Xtimate C18的长柱和短柱均能满足药典要求，短柱塔板数较低，但是药典没有规定塔板数，故两款色谱柱均能很好的检测安乃近中的有关物质。
    该仪器的定量环为5ul，就没有进行进样量体积变化的考察。

销售人员反馈的，客户检测安乃近，使用了多家色谱柱，柱效都很低，为2000左右，而我们的检测结果250mm的长柱柱效为8000以上，远远高于客户目前使用的柱子，于是开始试用，新柱到手，活化，进样，出结果，柱效2000多，和别家的没有什么区别，打电话沟通，多进样几次，还是一样，客户质疑，我们使用了流动相溶解样品（客户表示用流动相溶解后柱效就很高，真搞不懂药典的那些人为什么不用，溶解度没有问题），一直确认这个事情，因为是真正的用的是甲醇溶解，我也不能只顾我这边检测出来好结果，而客户重复不出来，我就相当于没有做这件事情呀，期间换试剂，换仪器，换样品批次，都是这样。，客户怀疑我使用的色谱柱和客户的不一样，这当然是不可能的，我们都是随机的领取色谱柱检测的，当然客户的需求我们肯定是要满足的，柱子寄过去了还是一样，柱效2000多，这就神了奇，奇了怪了，于是我直接和客户沟通，看是否是实验的细节有些什么问题，当说到我的进样体积为5ul，样品浓度增加了时，就不一样了，客户说就说这个品种不能这样，体积变化对柱效影响大，于是重新检测，报告如下


安乃近片的测定



一．样品分子结构

中文名

英文名

分子结构

安乃近

Metamizole Sodium Tablets





二. 样品来源记录

样品商品名：

样品测定描述：主成分含量测定

生产厂家：市售

三. 液相方法条件

方法来源：《中国国家药典2010版第二部》P286；

具体方法：

色谱柱：C18，5um，4.6×250mm；                                       

检测波长：254nm；                           

流动相：甲醇：磷酸盐缓冲溶液(磷酸二氢钠6.0g，加水1000ml，加三乙胺1ml，用NaOH溶液调节pH为7.0)=25：75；                                           

温度：室温23度；                                 

流速：1.0ml/min；                         

进样量：10ul； 

流动相的配制：

    1）磷酸盐缓冲溶液的配制：磷酸二氢钠6.0g，加水1000ml，加三乙胺1ml，用NaOH溶液调节pH为7.0；

2）准确量取甲醇125ml、、上述配置好的磷酸盐缓冲溶液375ml，摇匀后，超声脱气；

样品处理方法：

样品处理方法：将市售的安乃近片磨碎，混匀，精密称取0.0777g至10ml容量瓶中，用甲醇并稀释至刻度，超声使其溶解摇匀即得；

四. 谱图及数据

1. XB－C18，5um，4.6×250mm ：


2、Xtimate C18，5um，4.6×250mm    色谱图：
3、AQ-C18色谱图：

结论：有客户所说的情况，进样量小，有很好的峰形和塔板数，进样量增大塔板数很低，由此可见是因为进样量大引起的柱效低，峰形变差，更改进样量是在药典允许的范围内。

    写出这篇原创，是给大家一个参考，安乃近的检测中没有规定柱效
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kaikaifeng
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2010/11/16 9:37:41 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
进样量增大，相当于原点增大，是这意思吧？
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chenping0829
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2010/11/16 20:41:24 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我想问问进入色谱柱的样品量是一样的吗？我想知道进样体积不同、样品浓度不同，但是最终进入色谱柱的样品量是一样的，比如药典规定浓度1mg/ml，进样10ul，现在配的浓度是0.5mg/ml，进样20ul，色谱图的区别大吗？
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小卢
luxw
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2010/11/16 22:34:18 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 chenping0829(chenping0829) 发表:
我想问问进入色谱柱的样品量是一样的吗？我想知道进样体积不同、样品浓度不同，但是最终进入色谱柱的样品量是一样的，比如药典规定浓度1mg/ml，进样10ul，现在配的浓度是0.5mg/ml，进样20ul，色谱图的区别大吗？


这个是没有区别的，如果是流动相溶解的话；
药典中规定进样体积前，都规定了配制样品的浓度。
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小卢
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2010/11/16 22:41:07 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.一般情况下，进样量变大会使塔板数变大，但也会使拖尾因子也差；因此在考虑改变进样量时也不能一味增加进样量。

2.再有就是此方法中流动相的配备也会影响到峰形，因此也不能一味按照药典方法来配制，可以自己调节一下他们的比例，使峰形达到最好。

3.药典没有规定塔板数的话，说明药典委员会的编制人员也知道此方法的塔板数不高，我们在检验结果中是可以不用提到的。

该帖子作者被版主 czj_1027加 5积分， 2经验，加分理由：那么晚还回帖，谢谢
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小卢
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2010/11/16 22:41:58 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:
进样量增大，相当于原点增大，是这意思吧？


原点？怎么理解啊？
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牛牛
wozhuanyong
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2010/11/17 9:12:54 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 luxw-卢(luxw) 发表:
1.一般情况下，进样量变大会使塔板数变大，但也会使拖尾因子也差；因此在考虑改变进样量时也不能一味增加进样量。

2.再有就是此方法中流动相的配备也会影响到峰形，因此也不能一味按照药典方法来配制，可以自己调节一下他们的比例，使峰形达到最好。

3.药典没有规定塔板数的话，说明药典委员会的编制人员也知道此方法的塔板数不高，我们在检验结果中是可以不用提到的。



2010版药典就规定了可以在适当的范围内调节流动相比例等，这就对我们平时的操作有了可靠依据
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kaikaifeng
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2010/11/17 9:27:06 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 luxw-卢(luxw) 发表:
原文由 环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:
进样量增大，相当于原点增大，是这意思吧？


原点？怎么理解啊？

是我个人比较俗的说法，在薄层中经常用到
我是这么想的，进样量增大，甚至无限增大，分离度降低
5ul变到5L，等于跑流动相了
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雪妖
czj_1027
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2010/11/17 9:29:37 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 chenping0829(chenping0829) 发表:
我想问问进入色谱柱的样品量是一样的吗？我想知道进样体积不同、样品浓度不同，但是最终进入色谱柱的样品量是一样的，比如药典规定浓度1mg/ml，进样10ul，现在配的浓度是0.5mg/ml，进样20ul，色谱图的区别大吗？


是的，就是相差很大，我进5ul是1mg/ml
进10ul是0.5mg/ml
相差就很大，柱效影响最大
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xue2009
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2010/11/18 20:56:44 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个跟紫外检测器是浓度型检测器有关
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lingshike
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2010/11/22 12:01:54 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
恩，我也遇到这种情况，不过不是安乃近，有时候进样量的确不要太大，一般进5ul，如果进样量大的话，可能会产生峰型不好看，峰的对称因子不好等情况。
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