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主题：【求助】请教高手：贝克曼毛细管电泳如何实现DNA的检测

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katherine7
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发表于：2010/11/17 12:00:34 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请教高手：贝克曼毛细管电泳如何实现DNA的检测
要分离的是180-250bp整数倍的DNA片段
该以什么为标准品来进行检测呢？
现在在尝试用100bp DNA ladder用检测，但始终分离不出来
不知道是不是因为缓冲体系不好
目前用的是75μm的柱子，缓冲液0.1M 硼酸+ 0.1M Tris
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poplar_yang
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2010/11/18 5:14:29 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
分子太大，极性差异太小，所以你必须毛细管长柱
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katherine7
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2010/11/18 20:17:54 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 poplar_yang(poplar_yang) 发表:
分子太大，极性差异太小，所以你必须毛细管长柱


你是说用100μm的柱子吗？
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cpudaxiao
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2010/11/19 9:17:37 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 katherine7(katherine7) 发表:
原文由 poplar_yang(poplar_yang) 发表:
分子太大，极性差异太小，所以你必须毛细管长柱


你是说用100μm的柱子吗？


是75厘米，或更长的柱子。不是更大管径的柱子。
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sunpengwjh
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2010/11/19 20:34:20 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
贝克曼的仪器柱子长度是固定的几种么？
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spying
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2010/11/20 20:55:26 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:
贝克曼的仪器柱子长度是固定的几种么？

是固定的，应为外边有白色的管子，管子的长度是固定的！
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katherine7
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2010/11/22 9:38:39 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 cpudaxiao(cpudaxiao) 发表:
原文由 katherine7(katherine7) 发表:
原文由 poplar_yang(poplar_yang) 发表:
分子太大，极性差异太小，所以你必须毛细管长柱


你是说用100μm的柱子吗？


是75厘米，或更长的柱子。不是更大管径的柱子。

哦，是这个样子哦
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katherine7
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2010/11/22 9:41:42 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 poplar_yang(poplar_yang) 发表:
分子太大，极性差异太小，所以你必须毛细管长柱


那请问，除了改用毛细管长住外，在分离DNA时，缓冲体系上是否要用硼酸来调pH呢？
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jcok123
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2010/12/6 11:32:23 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 katherine7(katherine7) 发表:
请教高手：贝克曼毛细管电泳如何实现DNA的检测
要分离的是180-250bp整数倍的DNA片段
该以什么为标准品来进行检测呢？
现在在尝试用100bp DNA ladder用检测，但始终分离不出来
不知道是不是因为缓冲体系不好
目前用的是75μm的柱子，缓冲液0.1M 硼酸+ 0.1M Tris


给你介绍一篇我们课题组发表的文献吧，应该对你有帮助

Tetrabutylammonium phosphate-assisted separation of multiplex PCR products
in non-gel sieving capillary electrophoresis
该帖子作者被版主 sunpengwjh加 2积分， 2经验，加分理由：积极发帖！
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poplar_yang
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2010/12/7 1:55:10 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 katherine7(katherine7) 发表:
那请问，除了改用毛细管长住外，在分离DNA时，缓冲体系上是否要用硼酸来调pH呢？


pH值需要计算; 可设置楼梯; 硼酸可以pH4-12, NaH2PO4可以pH1-9等等
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2010/12/7 1:56:20 Last edit by poplar_yang
heguang
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2010/12/7 23:16:16 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你的缓冲体系里面为什么没有看到凝胶？Tris-硼砂的体系用来分离dsDNA是没有错，但是你一定要加凝胶进去的，没有凝胶，你怎么把不同长短的DNA分开呢？同时你还要考虑DNA在毛细管内壁吸附的问题，如果你用裸管做，你就要用有动态吸附性质的凝胶，PVP效果不错；如果你用的没有动态涂层作用的凝胶，你就必须要用涂层毛细管做。毛细管长短不是关键，一般分DNA的毛细管40-50cm足够，75um也没有问题（LIF检测），如果紫外检测就用100um。
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