主题:【求助】335nm处吸光值都非常低,怎么办?

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feixiang3152
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我最近在做蛋白质修饰率的测定。可是我每次做的结果都是未修饰和修饰过的在335nm处吸光值都非常低,大概在0.003或0.004。我采用的是TNBS法,具体如下:
1mL蛋白液(修饰蛋白和未修饰蛋白)+1mL4%碳酸氢钠+1mL0.1%TNBS,混匀后40°反应2h,再加入1mL10%SDS和0.5mL1N盐酸,在335nm处读取吸光值。修饰后蛋白质的吸光值/修饰前蛋白质的吸光值为残留氨基酸量。每次测定的结果都非常奇怪,那么低,我感觉不可信,根据原理应该是修饰后的吸光值小于修饰前的吸光值才合理啊。我也不知道吸光值应该在怎样的范围内正常?我们实验室没有人做过,请大家指点一下吧!哪里有问题呢?谢谢
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userwzy
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你为何选335nm,我记得蛋白一般在280nm,有相对较强的吸收啊
sunpengwjh
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i_am_ling
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