主题：【求助】毛细管区带电泳无峰？？？如何解决？---找到原因！

原文由 nini2006(nini2006) 发表:
电流太小了，特别是硼酸的，提高浓度试试。可以参考下文献，看人家用的什么内径的管子还有用多大的浓度。
另外，当buffer的pH=pI的时候，蛋白质是不带电的，这样的话即使出峰也有可能跟其他中性物质混在一起分不开。

个人很不喜欢SDS，这个东西会把迁移时间拖长峰变宽，而且不容易控制重现性。当然，你既然用了，条件就要摸索才行。有时候只是因为你跑的时间不够，峰还没出来就被你停掉了。

原文由 threetigers107(threetigers107) 发表:

原文由 nini2006(nini2006) 发表:
电流太小了，特别是硼酸的，提高浓度试试。可以参考下文献，看人家用的什么内径的管子还有用多大的浓度。
另外，当buffer的pH=pI的时候，蛋白质是不带电的，这样的话即使出峰也有可能跟其他中性物质混在一起分不开。

个人很不喜欢SDS，这个东西会把迁移时间拖长峰变宽，而且不容易控制重现性。当然，你既然用了，条件就要摸索才行。有时候只是因为你跑的时间不够，峰还没出来就被你停掉了。

谢谢一楼帮我贴图。昨天搞了老半天不知道怎么弄上去，主要是电脑太慢了。。。
看了一些文献，一般buffer用的浓度也不是太高，20,50,100mM不等；毛细管主要有50和75两种粒径的，长度40,50cm不等；分离时间的话就不太清楚了。不知道各位一般是多长时间的。我做的是一个多聚体的酶和一个peg化的样品

原文由 threetigers107(threetigers107) 发表:
我用Test A测试Test B，也是什么峰也没有。工程师说可能是柱子处理的问题。我是按照论坛里一个帖子上说的，用1 N NaoH/30min+1N Hcl/30min+0.1N NaoH 30min+水+buffer，处理的。不知道这样有什么不对

原文由 nini2006(nini2006) 发表:

原文由 threetigers107(threetigers107) 发表:
我用Test A测试Test B，也是什么峰也没有。工程师说可能是柱子处理的问题。我是按照论坛里一个帖子上说的，用1 N NaoH/30min+1N Hcl/30min+0.1N NaoH 30min+水+buffer，处理的。不知道这样有什么不对

柱子的前处理影响没那么大的。

受某个帖子的回复启发，找到原因了。因为对一个方法参数没理解透，设置错误。就是polarity,有Normal和reverse之分。原来只以为它是管进样方向的，原来和分析模式有很大关系。因为之前做CE-SDS，用的是REVERSE，在做CZE的时候就没改这个参数，所以连测试样品都不出峰。不过我还没有搞清楚分析模式-样品-ploarity之间的关系。哪位帮忙扫盲下。谢谢~

如果考虑用动态涂层或者直接买涂层的柱子，不知道各位有没有推荐的。感激不尽！！！