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主题：【求助】毛细管环糊精电泳分离黄酮

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babylon
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发表于：2010/12/15 20:38:52 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位请教一个棘手的问题：

本人用毛细管环糊精电泳分离中药中的黄酮类物质，用的硼砂，β环糊精体系，ph是9..4左右。分离7个marker,包括槲皮素，芦丁，芹菜素，黄芩苷等。

如果直接用缓冲液，对照品可以分开，但是中药样品里的杂峰和待测物分不好，所以参照文献，加入了乙腈作为改性剂，效果很好，峰很尖，并且峰的保留时间延长后能够很好的分离，但是问题出现了：

1. 开始做的时候还好，慢慢的峰的重现性就很差，甚至连顺序都有差异。然后峰出现拖尾，变宽。我的乙腈的加入比例是1:4，即缓冲为4份，乙腈为1份。是否太大？

2. 出现峰变宽的情况应该如何处理？用高浓度的NAOH冲柱子？我有尝试过，但是发现效果不是很理想。
3. 进样的时候，每针之间用什么溶剂冲比较好？坛子里有人说用NAOH，但也有说NAOH不好的 ，到底如何解决？

4..如果想改善样品中各个峰的分离度，即优化条件，主要靠调节什么？？（比如想改善峰与峰之间的分离度，在反相液相色谱里面就是加大水相）

希望高手能够回答，谢谢
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sunpengwjh
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2010/12/15 21:18:46 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以试一下用碱液冲洗，后用缓冲溶液平衡，看看怎么样！
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babylon
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2010/12/15 23:27:34 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我尝试用1M的NAOH冲洗后，用水冲再用缓冲液平衡，但是改善不太明显。你说的缓冲液平衡的时间是多长？1小时？我只平衡了10min而已
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userwzy
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2010/12/16 10:32:39 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果是开始分离好，后来重复性变差，感觉是柱子的状态不好了。 普通的进样之间，只有buffer 冲洗就可以了，有的时候需要NaOH，H2O，buffer， 有些时候可以用酸，NaOH，H2O，buffer， 甚至用有机溶剂冲洗。

想改善分离度，你可以先调节一下ACN的比例。
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babylon
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2010/12/17 14:13:49 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感觉毛细管电泳用着用着就效果不太稳定了，不过确实，多用buffer平衡一下就会有很好的重复性
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sunpengwjh
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2010/12/18 0:22:05 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 babylon(babylon) 发表:
感觉毛细管电泳用着用着就效果不太稳定了，不过确实，多用buffer平衡一下就会有很好的重复性

可以的，每次进样之间也可以用缓冲溶液来平衡一下！
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poplar_yang
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2010/12/18 4:41:06 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感觉是柱子的状态不好了
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babylon
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2010/12/20 13:38:37 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是的，今天电流加不上去了？不晓得为什么
瓶子底下还有小液珠
像倒流进去的
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i_am_0
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2010/12/20 18:09:22 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 babylon(babylon) 发表:
是的，今天电流加不上去了？不晓得为什么
瓶子底下还有小液珠
像倒流进去的

有小液珠？什么意思？小瓶不是都有缓冲溶液的么？能在详细的说一下么？
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cpudaxiao
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2010/12/24 20:40:45 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你的条件里乙腈的比例太大了，所以导致重现性差。可以做个浓度梯度看一下。
在分离缓冲液的成分固定时可以调节浓度和PH，或者加分离改性剂。
进样时每针之间不要用浓NAOH，对管壁的改变太剧烈了，用8-10 MIN 的缓冲液冲就好了，连续进三针以后考虑用0.1 M 的NAOH冲1-2 min就可以了,
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babylon
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2011/1/2 12:14:44 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
九楼，浓度梯度怎么个做法？俺考察了的，只有在4：1的时候峰分得还可以。要不分不开，很麻烦；另外高手，乙睛的浓度在多少重现性好一点？？
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