U V-2550仪器操作规程
1. 开机预热1.1先打开电脑主机和显示器,再打开仪器的电源,打开软件UVProbe2.21,单击[img=99,41]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.jpg[/img],出现如下对话框:[img=447,318]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image004.jpg[/img]
仪器进入初始化状态。1.2初始化大约需要5min,进行一系列的机械和光路的检查和初置,当所有初始化项目都变绿后,即初始化完成,单击OK。就可以开始测定。1.3初始化完成后,一般需要预热15min左右,即可进行操作。2.基线校正2.1选择[img=94,27]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image006.jpg[/img]中的[img=29,23]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image008.jpg[/img](photometric光度),打开光度模块。2.2单击光度计键条中的[img=90,31]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image010.jpg[/img](baseline基线),启动基线校正操作。基线校正设定当前选择的波长范围内的背景为零,在此范围内的所有后续的读数都受其影响。基线校正确保在采集数据时有较好的参照点。2.3当基线参数对话框弹出时,[img=285,161]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image012.jpg[/img]
在开始波长和结束波长中分别输入700和300。也可在实验所需的波长范围内进行基线校正。点击OK,开始从700nm进行扫描,注意在基线校正过程中光度计状态窗口的读数变化。变化多少可以接受?2.4点击输出窗口Instrument History(仪器履历)标签。查看列出的基线校正信息。当完成基线校正后,可进行以下操作。 3.光度测定3.1首先选择测定方式,在主菜的[img=92,20]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image014.jpg[/img]所示的各键中,选择[img=26,25]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image016.jpg[/img](photometric 光度)。3.2 参数的设置(以硝酸盐为例说明)点击菜单栏中的[img=27,25]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image018.jpg[/img]键,出现图1.1:[img=442,353]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image020.jpg[/img]
图1.1
在wavelength(波长类型)中可供选择point(点)和range(范围),point表示测定高度?;如果选择的是range,则需输入起始和结束波长。例如选择Point,在Wavelength(nm)中输入538,则Column Name也出现相应的变化,最后点add加入,点下一步,出现图1.2,[img=479,401]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image022.jpg[/img]
图1.2
在Type中选择Multi Point,在Formula中选择Fixed Wavelength,WL1选择上一步添加过的波长,例如WL1538.0为上面添加过的。Untis 为单位设定,可添加自己需要的单位。哪个参数的单位? Parameters中选择Abs=f(Conc),order of选择1st,表示标准曲线方程为一次方程。zero interception不选择,只有当用single point(单点)的时候选择,单击下一步;出现图1.3:[img=479,401]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image024.jpg[/img]图1.3
一般选择默认状态,其中Sample选择表示重复测定的次数;Prompt before repetition表示在重复测定之前进行提示,再单击下一步;出现图1.4:[img=479,401]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image026.jpg[/img]图1.4
和上面类似,用默认设置即可。再单击下一步,出现图1.5:[img=425,356]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image028.jpg[/img]
图1.5
在Filename中,默认的文件路径和文件名,也可以自己更改。单击[img=27,26]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image030.jpg[/img]图标,出现图1.6,[img=389,225]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image032.jpg[/img]
可自定义文件名和路径,单击打开,对话框自动关闭。在图1.5中自定义Title,Analyst,Comments,单击close关闭对话框。3.3标准表设定在Stand table 栏中单击右键,出现一个菜单,选择Properties,出现如下对话框,[img=353,223]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image034.jpg[/img]
设定Sample ID Name和Step Value,选择了Auto Fill后,就可进行自动填充,单击表格栏,自动插入一行表格,并给sample Id 自动命名。Weight Factor用默认的1;选中Columns后,出现如下对话框,[img=341,215]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image036.jpg[/img]
在Column中选中一个,单击Show( 显示)或Hide(隐藏),即在Standard Table中显示或隐藏,或直接双击Show或Hide即可;Rows同理有显示和隐藏功能。设置完毕后关闭对话框。并将样品浓度和其他所需信息输入到标准表中。 其他各栏单击右键同样出现菜单,点Properties同样可进行设置。3.4自动调零单击[img=93,28]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image038.jpg[/img],进行自动调零。自动调零是将某一波长下(如538nm)的吸光度校为零。当自动调零结束后,开始下面测定。3.4参比测定做参比时,点cell blank,测定空白,出现一对话框,如下:[img=320,244]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image040.jpg[/img]
扣除空白对标准溶液的影响。 3.5标准曲线绘制在样品室逐个放入标准,点击[img=94,32]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image042.jpg[/img]键即可。软件自动测定各标准溶液的吸光度,并自动绘制标准曲线。所配标准溶液的吸光度在0.15~1.0范围内,吸收测定的精密度约为0.5%(注:摩尔吸收系数为105l/mol.cm、光程为1cm的石英皿,浓度为1*10-6~1.5*10-6mol/l范围时,即可得到0.15~1.0范围的吸光度)。标准测定完毕,工作曲线自动显示。接下去测定未知样品的浓度了。3.6样品的测定 在Sample table(样品表)中设定样品的信息,点击右键可进行自动填充等设置,点击[img=94,32]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image042.jpg[/img]键即可。3.7储存单击工具栏中的[img=30,26]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image044.jpg[/img](保存)或单击File下拉菜单中的Save,保存到C盘/Program Files/Shimadzu/UVProbe/Date。若要保存到指定的文件夹下,单击File下拉菜单中的Save as,出现如下对话框,[img=370,262]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image046.jpg[/img]
指定所需要的路径和文件名,单击保存,即可保存在指定的文件夹下面。光度测定文件包含标准和样品表信息,并将文件类型存为*.Pho,然后输入文件名和点击储存。(注意:最基本数据容器是文件,所有的数据都存储到文件内;文件可细分为储元,储元可再细分为数据集。每个文件至少有一个储元。每个储元至少有一个数据集。)4、仪器维护4.1分光光度计实验室的室温保持在15~35℃,相对湿度宜控制在45%~80%(假如室温大于30℃,相对湿度不得大于70%)。防尘、防震、防电磁干扰,仪器周围不应有强磁场。不要暴露在阳光直射的地方,不要放在有腐蚀性气体或在UV波长范围内有吸收的有机和无机气体的环境内。防止腐蚀性气体侵蚀,当测量具有挥发性样品溶液时,吸收池应加盖。4.2如果开机后钨灯和氘灯不亮,应首先检查保险丝。若断了应更换新的3.15A的保险丝。注意更换保险丝时,关闭电源开关并切断电源。4.3样品室的出射和入射石英窗不应有污染,不要用手触摸样品室中透光窗面,若不小心接触过,要用无水乙醇擦拭。假如在石英窗上发现有染色剂,应清洗干净以防影响测定。要小心保护比色皿的透光面,只能用镜头纸或脱脂棉轻轻擦拭;。避免硬的物品把透光面划伤。定期清洁样品室,擦洗样品室底部以清洗溅出的液体样品,防止其蒸发和腐蚀样品室,或由于腐蚀而得到错误结果。5、 期间核查5.1期间核查的频率 正常情况下为两次检定之间,即每半年进行一次,遇到有仪器设备维修、对仪器设备有怀疑或有特殊需要的情况下,应临时进行期间核查。5.2波长准确度的校正方法一:利用氘灯的两个特征波长峰486.0nm和656.1nm来检查波长的精确度。如果特征波长峰没有落在指定的范围,请与服务商联系。方法二:将镨铷滤光片置于样品室内,对准光斑(做样品测试状),盖上样品室盖,进行光谱扫描。扫描完毕后,观察波长是否为807.0±3.0nm即在804~810之间。如果在,说明波长准确;如果不在,请与服务商联系。用镨铷滤光片,虽方便,但准确度不高。5.3吸光度校正常用重铬酸钾的0.005mol/l 的H2SO4溶液(入max=210nm)作为标准校正溶液,此溶液公认的吸光度值分别以重量吸收系数(l/g.cm)、比吸收系数(Al cml %)和摩尔吸收系数(l/mol.cm)表示如下:
波长(nm) |
235 |
257 |
313 |
350 |
A(重量) |
12 |
14.5 |
4.9 |
10.7 |
A(比) |
124.9 |
144.2 |
48.8 |
107.1 |
A(摩尔) |
3676 |
4272 |
1436 |
3151 |
通常用摩尔吸收系数表示。5.4杂散光杂散光是由于单色器中的散射和慢反应引起的。此仪器在绝大部分波长范围内杂散光的强度通常小于0.1%,常可忽略。