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紫外可见分光光度计（UV）

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主题：【线上讲座47期】紫外-可见分光光度法新项目开发解决方案（提问十积分奖励）

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2011/2/23 21:55:49 93楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

zhenduanye您好！我有以下问题想请教，
请问：某物质的最大吸收波长是410nm，假如波长我选择405nm，会对结果产生多大影响？有没有一种情况使波长选择在405nm时不会对结果产生影响？

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2011/2/23 21:59:05 94楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 北京哈默尔(zhenduanye) 发表:
原文由 coffee8(coffee8) 发表:
zhenduanye您好！我有以下问题想请教，
请问：有些方法选用的波长并不是最大吸收波长，那最终选用的波长是根据什么原则确定的呢？

这位老师的这个问题问的比较好
一般情况下选用最大吸收波长，但有时候不选择最大吸收波长，有如下几种情况，根据情况进行选择
1 最大吸收波长处有干扰，比如最大吸收260纳米，而在260纳米有干扰组分在此处也有吸收，为了避开干扰，可以稍微改变一下测定波长，从而消除干扰。这里图解说明最好，我先简单的画一个，和大家分享一下。
从图中可以看出，最大吸收处有干扰，可以稍微的往短波长移动一下，避开干扰。
2第二种情况，就在最大吸收波长处在换灯的地方，一般去改变灯的切换点来达到保留最大吸收。但有时候考虑到灯的能量等因素，也可以改变不在最大吸收波长处测定。
3 当某组分不止有一个吸收波长时，考虑到灵敏度和稳定性的等方面的原因，也会采用别的吸收波长进行测定。

从上图如何看出最大吸收有干扰？我有点看不明白，老师帮忙解释下好吗？谢谢

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这站不远

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2011/2/23 22:02:19 95楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 happydog2004(happydog2004) 发表:
zhenduanye您好！我有以下问题想请教，
请问：能举例介绍导数光谱消除干扰的原理及数据处理步骤么？如果工作站没有导数处理功能，只能得到原始数据的话，我们该如何获得导数光谱呢？应用何种数据处理软件？我们实验室的紫外分光光度计型号为UV-2550。

这个问题问的非常好，谢谢
首先，导数光谱的原理zhouyuhu老师的笔记里面有，你参看一下，我也是参看他的。
具体步骤是对原谱图进行一阶处理，看干扰组分是否能分来，如果不行，建议用二阶。一般工作站提供四阶。如果还要，可能要花钱购买一些数据包。
有一点需要注意，就是在进行定量的时候，标准样品和样品的阶数一定要一致。
第二个问题，如果没有导数处理功能的工作站，可以利用orger软件进行处理，好像是这么拼写的。
2550的采用UVPROBE，是具有四阶导数处理功能的，具体操作可以参看说明书，不行的话再联系我，告诉您怎么处理。

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2011/2/23 22:29:55 96楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我传一个氘灯和钨灯的大家分享下，岛津2550做的，和大家分享下

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2011/2/23 22:30:44 Last edit by zhouyuhu

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2011/2/23 22:33:58 97楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 happydog2004(happydog2004) 发表:
zhenduanye您好！我有以下问题想请教，
请问：能举例介绍导数光谱消除干扰的原理及数据处理步骤么？如果工作站没有导数处理功能，只能得到原始数据的话，我们该如何获得导数光谱呢？应用何种数据处理软件？我们实验室的紫外分光光度计型号为UV-2550。

在普通吸光光度法中，如果吸光度很小，就不能得到精度很好的信号；如果其他组分的吸收重叠在吸收峰上，测定就会受干扰。导数光谱法有可能克服这些困难。近几年分光光度计的发展,使很多仪器具有全波长扫描和导数光谱处理功能,使导数光谱有了更快更好的发展。

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2011/2/23 22:50:35 98楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

4导数值的测量方法
导数光谱的测量很多,下面分别说明
4.1如果基线是平坦的，可以测量峰-谷之间的距离，这是最常用的方法。
4.2在基线平坦的情况下，也可以测量峰-基线之间的距离，这时灵敏度虽有些降低，但精度较高。
4.3作两峰的连接线，测量两峰连线到谷的距离。只要基线是直线，不管它是否倾斜，总能得到正确的值。
4.4作峰顶与谷顶的切线，使其平行于基线，然后测量两平行线的距离。
以上四种方法,是前辈们总结的,非常经典的方法,但是现在,尤其是带导数处理工作站的,不具备4.3和4.4的功能,采用峰值检测,能实现4.1和4.2,而我个人认为,4.1和4.2也存在着一定的误差,所以,我重点介绍的方法马上就要闪亮登场了---积分面积.

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2011/2/23 22:52:02 99楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

在普通吸光光度法中，如果吸光度很小，就不能得到精度很好的信号。如果其他组分的吸收重叠在吸收峰上，测定就会受干扰。导数光谱法采用微分求导,在谱图上显示出微小的变化,使光谱图的分辨率得到了很大的提高.导数光谱的特点在于灵敏度高，可减小光谱干扰。因而在分辨多组分混合物的谱带重叠、增强次要光谱(如肩峰)的清晰度以及消除混浊样品散射的影响时有利。
1导数光谱的优势
导数光谱法有一般分光光度不具有的优势,主要表现在以下几个方面:
1.1能分辨两个或两个以上完全重叠的或很小波长差相重叠的吸收峰.
1.2能够分辨吸光度随波长急剧上升所掩盖的弱吸收峰(有人称为肩峰)
1.3能够确认宽阔吸收带的最大吸收波长
以上从谱图角度来将,从灵敏度角度来说,提高了不少,应该说很多.我曾经这么说过,一台可以进行导数光谱的紫外分光光度计,可以赶上一台带紫外检测器的HPLC,可能有点夸张,至少我个人这么认为.
1.4灵敏度
关于导数吸光光度法提高灵敏度的规律，有人指出n阶（n＝1～4）导数吸光光度法的灵敏度是按4.5n倍增大。
2理论基础
2.1定量基础
其原理是因为吸光度和摩尔吸光系数为波长的函数，所以朗伯-比尔定律可以用下式表示：
Aλ＝ελcl
将上式对波长进行一次微分，得

若对波长进行n次微分，可得

2.2导数光谱图的处理
吸光度对波长进行微分的微分值与吸收物质的浓度成正比,符合朗伯-比尔定律，因此它可以用于吸收物质的定量分析。
获得导数光谱的方法可分为光学微分法和电学微分法两类.现在很多带计算机的工作站都采用电学微分法,通常可以获得一、二、三、四阶导数光谱。比如俺现在用的2550,就能做到四阶.

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