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主题：【分享】复旦大学生化与分子生物学实验室实验室手册

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发表于：2011/03/27 17:34:12 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

实验室就像一个大家庭，没有“规矩”就没有秩序。每个成员都要为实验室的正常秩序而不懈努力。本手册是每个成员的行为准则，每个老成员有责任和义务用它来教育新加入实验室的成员。

一、行为道德

实验室是进行科学研究的场所。诚实是进行科学研究的基本。尽可能多发论文，发高质量的论文，是每个成员的应尽义务，同时也提倡成员间的互相帮助。
坚决杜绝任何篡改数据的行为，不然会害人害己。而数据的修改，需要在得到实验室主管的许可，并在其监督下进行。本实验室一旦发现伪造数据现象，将立刻开除期当事人之学籍。
论文著者排名：第一作者为论文的主要完成人，包括写作；如果做实验的人没有完成论文的写作就离开了实验室，那么第一作者就很可能是后面帮助重复实验和写作的人；论文的通讯作者是对论文内容负责的人，一般是实验室的头，放在著者排名的最后（除非博士后有特殊需求，也需得到头的许可才可以成为通讯作者）。
实验室成员需对自己的个人生活负完全责任，不得因此影响工作。有特殊困难的，可以请求帮助。

二、课题、工作时间和假期

研究生的课题选择分两种情况：出于实验室的发展需要而需要进行的课题；围绕人类重大疾病选择自己喜欢而实验室又能支撑的课题。
按照国际惯例，研究生原则上没有寒假和暑假。本实验室允许大家在安排好工作的基础上适当休假，但寒暑假休假实验室不发工资。
本实验室采用柔性工作时间制，但除非有特殊理由，每天到实验室的时间不得晚于10:30am。长时间外出，需要适当说明和请假。

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2011/3/27 17:35:17 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

三、实验室安全须知

实验室的安全问题关系到每个人的切身利益。实验室危害源按大小区分如下：放射线、病毒 >>氯仿> EB / acrylamide >臭氧。
放射性元素本实验室不使用，因此不必担心。将来做同位素实验，需要接受王维荣老师（本实验室同位素实验上岗证持有者）的安全指导；
特别需要关注的是氯仿，会导致肝肿大、肝硬化，如果瓶子的内塞不盖，会不知不觉中挥发，不知不觉中实验室所有人都吸入了氯仿。新开瓶的氯仿要在上面加上0.5 cm厚的离子水，防止氯仿挥发。
本实验室所从事的研究范围内的病毒属于安全系数较高的范畴，但对于出实验室的样品和导入下水道的废液，需要严格灭活处理。处理方法：废液高温灭菌，器具NaOH浸泡）。
EB在Ames test中显示有致突变活性，但实际上不能穿越表皮，因此即便沾在手上也危害甚微。如果浓度比较高，可以用次氯酸钠等氧化剂擦手。
臭氧会导致肺气肿和肺纤维化，因此要尽量缩短开石英紫外灯的时间（只有石英灯管才会发生臭氧），并尽量避免吸入臭氧；
向下水道倒废液，要注意将危害大的物质做适当处理：如考马斯亮兰染色液应该加入次氯酸钠将色素破坏后确认达到中和。

四、实验记录

实验记录目前在中国很不规范，但应该逐渐开始规范化。本实验室翻译的“At the helm”一书中有详细的描述，将是我们实验室的努力方向。目前可以做到的是，将任何细节都记录在实验记录本上，特别是和导师讨论后要记录讨论的时间和内容以及达成的共识。铭记――好记性不如烂笔头。
实验记录本需要妥善保存，离开实验室时将记录本留在实验室。因此你所记录的东西应该让后面查阅的人能够看懂，不要使用自己的“暗语”和“记号”。
本实验室成员独自开发过改良过的的实验protocol，当不怨其烦地进行整理，放在服务器的实验室工具箱中，以便其他人共享。

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2011/3/27 17:36:02 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

五、实验室工作应该注意细则

实验室的任何东西都有它最应该放的地方。切记，哪里拿的放回哪里。
实验室区域划分：实验室分公用区域和个人实验区域。个人使用区主要为指定的实验桌和试剂架，指定的坐位，指定的4℃和－20℃使用区，冷库使用区；公用区域包括细胞室、大小摇床、大小离心机、PCR仪、称量区、HPLC室、动物箱、破菌机、成像系统、核酸电泳区和蛋白质电泳区、灭菌室、RNA实验区、冷库、生活区、浴室等。所有公用区需要保持清洁和空闲，不能因为个人样品不收拾而影响别人的正常使用。
试剂是实验室的血液。任何试剂接近用完时，或有特殊试剂需求时，必须先向实验室负责试剂定购的人员提出，必要时向实验室负责人商量定购事宜。
正确的标签，是保证实验室正常运转的最低要求。标签必须写明4个要素：试剂名称、浓度（及pH）、人名、日期。如果高温灭菌过，也请注明。严格禁止使用个人编号。只要是使用时间在一天以上，就要具体写清楚这4个要素。要像“小狗见了电线杆一样”，多多留下你的标签。强烈建议所使用的试剂一定要自己配。
器皿洗涤：个人使用的玻璃和塑料器皿，需要各自负责清洗、凉干。玻璃器皿橱、灭菌室门、仪器室门要始终保持关闭状态。如果你相信只由你一个人使用的物品，可以存放在你自己的抽屉。
细胞培养须知：细胞室负责人为闵太善老师，负责血清定购，培养基、培养皿等试剂的定购，培养箱加水等；新配培养要冻在－20℃，由闵太善分装并加入双抗后派分给大家（分装血清前也在血清中加入双抗），这样可以最大程度避免污染；进入细胞室一定要换鞋；培养室显微镜一般不要切断电源，只把照明亮度调小，这样做是为了延长灯泡的寿命；所有的培养皿上都需要写上自己的名字；做完实验要将所有物品进行清理，看到消毒棉花少了就进行补充；看到消耗品少了，及时告知小闵；由于做细胞实验人员多，地方小，大家一定要多互相关照，优先考虑有重要实验的成员的需要；发生霉菌污染，用抗真菌药物进行抑制，不要马上抛弃；多带口罩做实验，避免发生支原体污染；细胞室的打扫，由使用人员轮流进行（闵负责指挥）。
使用层析载体时，一定要好好阅读有关资料，了解载体的性质。分离纯化蛋白质和核酸的层析载体多数是由可被微生物降解的材料做成的，因此每次层析后只要第二天不用，就应当用20％的酒精进行置换（这个条件下没有微生物可以生存）。层析柱不能为了保存就放到4度的冷库里去，不然拿到室温就会出现气泡；如果是ProteinA亲和柱之类的带蛋白质配体的层析柱，就应该一直在低温操作；如果低温保存的柱子需要搬到室温操作，就应该在最短时间内将柱子里的液体置换成室温的液体；中压和高压的层析柱一般常温保存，不要在低温保存；一旦在层析柱中出现气泡，最有效的解决办法就是将缓冲液用微波炉加热煮沸后迅速冷却，然后过柱，利用空气溶解度的差异来吸收载体中的气泡。
实验桌使用注意：实验室人数大于实验桌数，要及时清理桌面上的东西以方便别人临时使用。同样，使用了别人的实验桌就一定要将之打扫干净。

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2011/3/27 17:36:29 Last edit by 7336167

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2011/3/27 17:43:02 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

PCR须知：定期用50％的酒精擦PCR上的样品孔，看好时间做实验，为了仪器寿命，不能让PCR仪4℃保温过夜。PCR的技术深不可测，每个人都要潜心研究，特别是污染的防止。Taq酶、dNTP都有储备，找相关的管理人员（洪洁、章宏海）要，然后妥善保存，不要用别人的备份以避免污染。
感受态：制备高效率的感受态，是保障研究工作正常进行的前提。每个人都应该定时活化工作菌株，每天接种一管大肠杆菌以备用。经常用pUC或pSK质粒检测转化效率，一旦发现转化效率下降就马上更换。制备感受态细菌的培养器皿一定要极力避免洗涤剂的使用。
试剂称量须知：从冰箱中取出来的固体试剂必须在37度温箱中加温，等试剂的温度高于室温后方能打开盖子称量；称毫克级试剂时，一次性往Eppendrof管中取出适当的量，称重后就按重量进行计算该加入溶剂的量。
冰箱、冷库使用须知：一般在各自划定的区域内使用－20℃冰箱（特别是卧式）时，将自己的盒子取出后再挑选，切勿长时间开着冰箱门影响别人样品质量。定期整理各自使用的冰箱区域，腾出试管架子。
限制性内切酶的酶切反应需在37℃培养箱中进行（整体加热），这样做是为了避免水分凝结在管盖上导致反应液中离子浓度偏高。贵重酶要尽量节省用量。
精密移液器（Pipetman）的正确用法：Pipetman不得在酒精灯上操作，不要习惯性空打（会造成磨损）。
离心机使用时：Hitachi高速离心机用后需将转子取出倒置。最重要的是，不管什么离心机，一定要将离心管进行平衡，不然离心机轴心会在一次不经意的不平衡后，发生永久性偏轴损伤。
带可调控性电源（电压和电流）仪器使用时，需将电压或电流调至零点方可以关电源。这样的仪器有：离心机、显微镜、电泳仪等。空调使用时应该注意不要经常开关，因为每次启动制冷相当于3小时的持续制冷的损伤；实验室日光灯应该保持一直开的状态，主方可保证最长寿命。
Agarose凝胶倒好后不及时用时，需在1小时内转移至TAE中保存。
带盖的离心管、试剂瓶等在进行高压灭菌时，需将盖子拧松或者在瓶口插一片纸；带徒弟时必须在第一课讲解灭菌要领。
废液回收：尽可能减少酚氯仿抽提时酚氯仿的用量，废液要回收。其他需要回收的废液：乙酸乙脂、吡啶、乙醚，及其他不溶于水的有机溶剂。
电泳仪和台式离心机需将电压调至最小后再关闭电源，这是为了让仪器长寿。
脱色摇床，培养摇床不用时要关闭（电机有使用寿命），不用的器皿、管子及时拿出。
实验服只能在实验区穿，不能穿出实验区，也不得穿入生活区。
浴室用后要打扫，将滤盖上的头发除去，将地板上的水除去。
实验室书籍尽可能不带离实验室。

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