4 测试方法
4.1 方法概述
本测试方法采用沉降法,即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿,经若干时间,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数,以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
4.2 所用的仪器和设备
4.2.1 高压消毒锅
使用时应严格按照仪器说明书操作。
4.2.2 恒温培养箱
必须定期对培养箱的温度计进行检定。
4.2.3 培养皿
一般采用Æ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
4.2.4 培养基
普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A(标准的附录)。
4.3 测试步骤
4.3.1 采样方法
将已制备好的培养皿按5.4.1.2的要求放置,打开培养皿盖,使培养基表面暴露0.5h,再将培养皿盖盖上后倒置。
4.3.2 培养
4.3.2.1 全部采样结束后,将培养倒置于恒温培养箱中培养。
4.3.2.2 在30℃~35℃培养箱中培养,时间不少于48h。
4.3.2.3 每批培养基应有对照试验,检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。
4.3.3 菌落计数
4.3.3.1 用肉眼直接计数,标记或在菌落计数器上点计,然后用5~10倍放大镜检查,不否遗漏。
4.3.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。
4.4 注意事项
4.4.1 测试用具要作灭菌处理,以确保测试的可靠性、正确性。
4.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。
4.4.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4.4.4 由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落与培养基沉定物的区别,必要时用显微镜鉴别。
4.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。