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主题：【求助】色谱柱柱压升高，如何冲洗

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laina0319
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发表于：2011/04/21 22:32:16 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 已解决
      各位大虾，我最近用完仪器（UPLC-MS/MS）冲洗色谱柱时，发现平衡时的柱压相对于以前高了不少，请问如何冲洗能恢复到之前的状态？我平时是用100%的甲醇冲洗，流速0.2ml/min，我用的是RP-18色谱柱。请指教！
推荐答案：cgx1982105回复于2011/04/22
你首先先检查一下看看到底是不是仪器有部分阻塞而导致的色谱柱压力升高。具体检查方法，撤掉色谱柱，将2根管路对接，然后用正常流速冲洗，如果压力过高，说明仪器发生堵塞。如果压力正常则说明柱子的问题。

如果确定色谱柱的问题，检查一下你是否使用了缓冲盐，如果使用了，建议用ACN/H2O=5/95或MeOH/H2O=10/90，将柱温提高至40-50℃，使用0.1ml/min或0.2ml/min的流速冲洗1小时以上，然后然后增大有机相的比例继续冲洗，最后再用纯甲醇冲洗。

也可采用反接的方式使用上面的方法进行清洗。
补充答案：

蓝精灵回复于2011/04/22

如果是新柱，不建议反接冲洗，如果用过缓冲盐，建议先用水：甲醇95:5或90:10冲洗，流速建议0.5ml/min，或者更低，冲洗40个柱体积左右，换纯甲醇或甲醇：水95:5再冲洗，看柱压是否下降
不过对UPLC柱子而言，因为内径很小，很容易污染导致柱压升高，因此要从源头抓起，也就是对样品处理要求很干净，对流动相要求也很高，最好是进口色谱纯试剂，使用前要用0.22的微孔滤膜再过滤

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2011/4/21 22:39:20 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
只用100%甲醇冲洗不行吧
如果你的流动相有缓冲盐的话，只有甲醇冲恐怕会有盐析出，更容易造成堵塞
还需要用一定比例的水相冲洗一下 逐渐提高有机相

不知道说的对不对，请专家指正
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netsking
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2011/4/22 3:16:09 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 laina0319(laina0319) 发表:
      各位大虾，我最近用完仪器（UPLC-MS/MS）冲洗色谱柱时，发现平衡时的柱压相对于以前高了不少，请问如何冲洗能恢复到之前的状态？我平时是用100%的甲醇冲洗，流速0.2ml/min，我用的是RP-18色谱柱。请指教！

可以试一试反接, 如果用了缓冲液做流动相, 可用50%MeOH冲30分钟然后再用75%MeOH冲30分钟, 重复5次后, 再用100%冲过夜.
如果没有用缓冲液, 可以直接走梯度, 在50分钟内从50%~100%MeOH, 重复5次, 再用100%冲过夜.
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cgx1982105
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2011/4/22 9:01:51 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你首先先检查一下看看到底是不是仪器有部分阻塞而导致的色谱柱压力升高。具体检查方法，撤掉色谱柱，将2根管路对接，然后用正常流速冲洗，如果压力过高，说明仪器发生堵塞。如果压力正常则说明柱子的问题。

如果确定色谱柱的问题，检查一下你是否使用了缓冲盐，如果使用了，建议用ACN/H2O=5/95或MeOH/H2O=10/90，将柱温提高至40-50℃，使用0.1ml/min或0.2ml/min的流速冲洗1小时以上，然后然后增大有机相的比例继续冲洗，最后再用纯甲醇冲洗。

也可采用反接的方式使用上面的方法进行清洗。
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蓝精灵
xuxue_19861016
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2011/4/22 9:16:30 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果是新柱，不建议反接冲洗，如果用过缓冲盐，建议先用水：甲醇95:5或90:10冲洗，流速建议0.5ml/min，或者更低，冲洗40个柱体积左右，换纯甲醇或甲醇：水95:5再冲洗，看柱压是否下降
不过对UPLC柱子而言，因为内径很小，很容易污染导致柱压升高，因此要从源头抓起，也就是对样品处理要求很干净，对流动相要求也很高，最好是进口色谱纯试剂，使用前要用0.22的微孔滤膜再过滤
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laina0319
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2011/4/22 9:21:34 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没有用缓冲盐的话，不用反接冲洗，直接梯度洗，再用纯甲醇冲过夜是吗
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2011/4/22 9:28:43 Last edit by laina0319
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2011/4/22 9:25:56 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用的流动相是甲醇-水，没有用缓冲盐。
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瓜瓜
dunedsy
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2011/4/22 9:47:08 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
还是建议用甲醇水混合溶液冲洗，实在降不下来可以看看你的在线过滤器筛板，更换后一般就OK了，如果真是堵在柱子这块的话可以换掉柱前筛板
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胜邪
nankingee
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2011/4/22 10:47:57 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3楼4楼都很棒
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gszhouyw
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2011/4/22 11:40:47 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
也有可能是预柱堵了，需更换了
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