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主题：【分享】细胞培养常见问题解答

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2011/4/29 19:44:38 21楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3、步骤：

（1）取50μl细胞悬浮液与50μl trypan blue（orErythrosinbluish）等体积混合均匀于1.5ml小离心管中。

（2）取少许混合液(约15μl)自血球计数盘chamber上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100倍倒立显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞则为蓝色（或红色-Erythrosin bluish）。

（3）计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数（至少乘以2，因与trypanblue等体积混合），最后乘以104，即为每ml中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上，只计上线与右线之细胞（或计下线与左线之细胞）。

注：4大格细胞总数×稀释倍数×104/4=细胞数/ml；每一大格的体积=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml

4、范例：

T75 monolayer culture制成10ml细胞悬浮液，取0.1ml溶液与0.1ml trypan blue混合均匀于试管中，取少许混合液加入血球计数盘，计数四大方格内之细胞数目。

活细胞数/方格：55，62，49，59；死细胞数/方格：5，3，4，6；细胞总数=243

平均细胞数/方格=60.75；稀释倍数=2

细胞数/ml：60.75×104×2（稀释倍数）=1.22×106

细胞数/flask（10ml）：1.22×106×10ml=12.2×106

存活率：225/243﹦92.6%
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yuduoling
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2011/4/29 21:19:30 22楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个资料不错，相当于一个讲座了
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lciu2011
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2011/5/2 11:51:58 23楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学习了，谢谢楼主分享
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