1 色谱条件
色谱柱:Promosil C18(250×4.6mm,5µm,;柱号:PM952505-0);流动相:0.1%磷酸溶液-乙腈 (87:9);流速:1.0ml/min;检测波长:207nm;柱温:25℃;进样量:10ul。理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000。
2 供试品与对照品溶液的制备
2.1 精密称取105℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品10.81mg,置100ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。
2.2 精密量取本品溶液2ml,置具塞锥形瓶中,精密加入氯仿25ml,浓氨试液2ml,称定重量,摇匀,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用氯仿补足减失的重量,摇匀,迅速滤过。精密量取续滤液5ml置蒸发皿中,加0.1%盐酸甲醇溶液1ml,置水浴上蒸干,残渣加甲醇溶解并定量移至10ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
3 测定方法
精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10u1,分别注入
液相色谱仪,测定峰面积,以外标法计算含量。
测定的对照品峰面积为:
对照品的含量为98%3361921
样品峰面积为:
1102362.938
面积外标法的计算公式为:
样品峰面积×对照品取样量(10.81mg)×对照品标示量(98%)×样品稀释倍数{2/(25+2+2)×5/10=29倍}÷对照品峰面积÷样品取样量(2ml)÷对照品稀释倍数(100倍)通过上述公式计算处理后的样品含量为0.503mg/ml,但是我认为这只是处理后的样品含量,再根据样品的处理过程计算出样品的真正含量应该为:
0.503×10×(2+25+2)÷5÷2=14.587mg/ml。
4
根据测得的结果我设计了线性试验:取对照品配制成浓度为2.0115mg/ml左右,分别精密量取0.5ml,1ml,2ml,4ml,8ml,10ml的对照品溶液,用甲醇定容至10ml容量瓶中,分别进样10ul,以峰面积Y为纵坐标,进样量X为横坐标进行线性回归计算,得回归方程为:Y=3.2×107+542313.9(r=0.9999),表明盐酸麻黄碱进样量在1.01~20.115ug范围内与峰面积呈现良好的线性关系。5 加样回收试验
我根据上述结果制定了如下的加样回收试验:精密量取1ml样品溶液,精密加入7.3mg对照品,然后按照供试品溶液制备方法制备,按照上述色谱条件测定。
我的上述试验过程及设计方法是否有什么不合理之处,请大家帮忙分析一下。