主题：【基础知识】－－键合固定相的基本原理

反相填料的特性
    反相填料的特性取决于键合相设计的许多不同参数和不同填料的具体生产过程，这点是无疑的。要把大量的数据聚集成对色谱工作者有用的信息，很重要的事请是要注意不同填料之间的相对应的特性。反相色谱填料有两个最主要的特性参数。一个是疏水性，可以很容易的通过纯的疏水性被分析物的保留因子来量度；另一个是硅醇基的活性强度，这最好通过一个相对保留值来量度：被分析物在疏水作用力和与硅醇基的作用力两者之间的作用对被分析物单纯受疏水作用力。对许多C8和C18的填料已经做过这样的测量，在这里或其他地方可以找到测量结果。下表清楚的总结了这些结果。（表略）X轴表示填料的疏水性，Y轴表示填料的硅醇基活性。疏水性的增加主要决定于碳链的长度。因此你会发现表的左边主要是C8填料而右边是C18。硅醇基的活性是在pH中性条件下测得的。填料用高纯度的硅胶基质并进行了有效的封端的填料硅醇基的活性小，可以在表的下方找。在Y轴上方，你能找到硅醇基活性高的填料。这通常是因为硅胶纯度不够高和/或是没有封端，这些填料有着不同的选择性，但它们常表现为在pH中性的流动相条件下对碱性被分析物产生拖尾。你可以从下表选出最适合你的分离要求的一种填料。如果你的被分析物是碱性的并且显示出与硅醇基有很强的作用，选择图中较下方的填料。如果你选择一种极性选择性差异明显的，你应该从表中不同部位选择。如果你简单的要找疏水性不同的，使用在疏水性轴上彼此差距较远的填料。

重现性
    时间是重现性的测验。有主要供应商生产的填料，许多都有较好的批间重现性，即使是在很长的一段时间里。

颗粒大小
表示和量度
    颗粒大小用微米做单位，并且指的是填料颗粒的平均直径。可以用许多的技术来测量并有不同的表示方法。对于不规则的填料，不可能定义一个“直径”。标示的直径是测量技术定义的等价的球直径。
    通常使用的HPLC填料有一个粒度分布。表示的颗粒直径可以是体积平均值或是数字平均值。因此很难比较不同生产商生产的填料的粒度。如果使用相同测量方法和直径定义，填料的标示直径为5微米的，可能实际值在4到6.5微米之间。粒度的实际测量最终要用填料的渗透性来评价（标准化反压）。

不同填料的比较
    平均颗粒大小对两个因素有影响。第一个是操作时的柱反压。反压与填料的直径的平方成反比。第二个是分离效率。固定柱长度，填料粒度越小柱效越高，因为扩散路径越短。在相同的柱长和流速的情况下，一根填的好的3微米填料的柱子分离度比5微米的高一倍，但代价是反压是5微米填料柱子的4倍。
    现在，流行的是5微米的填料。这样的粒度相同的分析时间内比10微米的分离效能好，反压也合适。用3微米填料的短柱子越来越流行，因为相同时间内分离效果比5微米的高。以前用3微米填料的柱子寿命短，但现在的技术已经可以达到提高柱效有不缩短寿命。

    3μm
    用于快速分析。如果你使用技术水平高的填料将可以提高速度而又获得高柱效又不会缩短柱寿命。
    5μm
    用于常规的分析。既有高的分离效能柱压也可接受。
    10μm
    曾经是分析应用的标准填料粒度，10μm的填料以较一般的效能可以得到较好的峰分离，即使是长柱。这类填料现在主要用于常规的QA方法或是分析方法放大到制备应用的尝试。
  >10μm
    主要用在制备。今天，球形的制备填料范围增大了，但最大达到20μm。超过20μm的只有不规则填料。
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