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分子荧光光谱

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主题：【求助】请教一个荧光强度的问题

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ravel

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发表于：2011/06/16 08:14:34 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

在日立F－7000上做荧光光谱。装积分球以前，样品设定狭缝 5nm 5nm，电压 400V，相对强度在200-400。
奇怪的是，换积分球做荧光量子效率，同样条件，荧光强度只剩下4-10，与此同时散射光强度出奇地高约为
几千，结果导致量子效率为0。向大家请教装积分球后，荧光强度为什么减弱了这么多？

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2011/6/16 17:09:54 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

怎么你这些量子效率的东西还没有搞定啊？
安装积分球后散射光肯定会强好多啊，原来的散射光是没有被捕集的，现在都通过积分球捕集后到检测器去了，自然高的不得了。但是荧光强度变弱也是不太可能的事情，肯定还是哪里有问题啊

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2011/6/16 17:10:01 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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2011/6/16 19:07:21 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 jixf_1114(jixf_1114) 发表:
怎么你这些量子效率的东西还没有搞定啊？
安装积分球后散射光肯定会强好多啊，原来的散射光是没有被捕集的，现在都通过积分球捕集后到检测器去了，自然高的不得了。但是荧光强度变弱也是不太可能的事情，肯定还是哪里有问题啊

确实还没有搞定，因为样品是膜，不知道用什么夹这个膜。是黑屁股白板还是硫酸钡板。
听到您的描述，我感觉不仅散射光要增强，荧光也应该增强。因为原来荧光也是四处发射的，也被积分球捕集了。

现在总算明白一点了。做的时候氧化铝先做，得到散射光强度1，然后放样品，得到散射光强度2和荧光强度，外量子效率应该就是

荧光强度/(散射光强度1－散射光强度2)

就目前的情况来看，散射光强度减少了接近1000，荧光强度只有4－5，所以效率0.004

我的东西效率应该有0.1以上，如果调高狭缝宽度或者电压，荧光虽可到100-200，但是散射光强度会超出范围。

东西是成在锡纸上的一个膜，做的时候直接把锡纸盖住积分球的孔，盖是全盖住了，不知道会不会漏光，如果漏光，散射光这一块就不准了。

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2011/6/17 13:38:53 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你说你的膜是镀在锡纸上的？多大的面积啊？
是不是光斑太小没有激发到？
参照你装积分球钱的结果，装了之后应该是比较好测定的。
至于用哪个白板现在还不重要，现在重要的是怎么把理想的效果弄出来。
既然确定这个样品是有荧光。那么在更换积分球后，首先确认安装正确，然后确认样品放置正确。

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2011/6/17 13:48:48 Last edit by jixf_1114

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2011/6/18 7:56:09 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 jixf_1114(jixf_1114) 发表:
你说你的膜是镀在锡纸上的？多大的面积啊？
是不是光斑太小没有激发到？
参照你装积分球钱的结果，装了之后应该是比较好测定的。
至于用哪个白板现在还不重要，现在重要的是怎么把理想的效果弄出来。
既然确定这个样品是有荧光。那么在更换积分球后，首先确认安装正确，然后确认样品放置正确。

感谢您的解答，锡纸大小3cm*3cm，膜基本覆盖整个锡纸。至于说光斑倒是有点好奇，测效率的时候，检测口的光斑又多大？可以调节吗？

我也觉得锡纸情况下什么白板并不重要，因为锡纸把积分球的口整个给盖住了。

关键的问题，我觉得是为什么散射光会减弱1000，而荧光只有10不到。我们那台机器这个条件下基线都有几十，是不是机器设置哪里出问题了。

当然还有一个可能，就是我的膜太薄，以至于荧光太弱导致误差增大。

有件事倒是我弄错了，安装积分球前后荧光并无太大变化，抱歉。

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2011/6/18 7:57:00 Last edit by ravel