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主题：【求助】用HPLC测氯酚出现异常峰形

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yellowdeer
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发表于：2011/06/16 06:25:04 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

第一次尝试用HLPC测2-氯酚，4-氯酚和2,4-二氯酚，按照别人文献上的方法使用50:50:2的甲醇：水：乙酸为流动相，流速1ml/min，使用C18 反相柱 (15-cm x 4.6-mm, 5 μm)，280nm紫外吸收，但是发现峰形很奇怪，感觉是一个峰出了一半又出现第二个峰似的，但是我所有的样品都是单独的纯试剂配的异丙醇标准溶液，而且奇怪的是每个物质的峰都是这种形状，不像是污染的样子(下面三张图，依次是2-氯酚，4-氯酚和2,4-二氯酚，前两分钟出现的峰是溶剂异丙醇)



后来尝试把流速加倍，效果也差不多，下面就是在2ml/min下的二氯苯

我也试过用不加乙酸的50:50甲醇：水，效果一样。
另外，这几个样品都是约100ppm的，但是峰都非常小，看别人的论文，检测限应该在100ppb级别的。我试过另外几个波长（210,220,254），都还没有280好。
想请教一下，一个是这个奇怪的峰形是什么造成的，一个是为什么我测出的信号会这么低。多谢~
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semibeauty
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2011/6/16 8:19:44 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
个人觉得，配标准的溶液不合适，洗脱能力强于流动相，还有就是你设置的流动相也有问题，前两个物质保留时间在死时间之前，可以说是无保留，可以调低有机相比例。。从这两方面入手再试试
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有水有渝
xky0230699
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2011/6/16 8:27:13 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
异丙醇标准溶液，为什么不用流动相溶解？进一个异丙醇看看溶剂峰在什么地方，色谱柱是新的吗，感觉像是色谱柱柱头污染了，建议清洗一下色谱柱后再做，或者溶剂效应太强导致肩峰。
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2011/6/16 8:28:38 Last edit by xky0230699
dahua1981
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2011/6/16 8:55:58 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是程序选择的不当
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Brooks
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2011/6/16 8:57:42 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1. 用异丙醇作为溶解样品的溶剂不一定合适，尝试用流动相，或者用比流动相洗脱力更弱的溶剂（比如含水量更高的溶剂）

2. 异丙醇不应该出峰吧，我看紫外检测波长已经是280nm

3. 这几个酚都有一定酸性，因此流动相应该用酸水，以抑制酚的电离。
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yellowdeer
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2011/6/17 23:52:49 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

多谢楼上众位的回复。我之前之所以用异丙醇配标准溶液，是因为我的样品是环境样品的正己烷提取液，为了让提取液能够在极性流动相里溶解，安捷伦的客服建议用1：1的异丙醇稀释。现在根据大家的建议，我换用1:2的异丙醇：甲醇配标样（1:1甲醇不能完全溶解正己烷），出峰峰形好了一些，但是峰宽其实还是比较大，不知道有没有进一步改进的办法？

另外，几位的回复中，“保留时间在死时间之前”是怎么判断出来的？还有清洗柱子应该用什么试剂呢？多谢
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有水有渝
xky0230699
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2011/6/18 11:29:13 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
正己烷提取液直接用氮气把正已烷吹干了再用50%甲醇溶解试试。先检查样品在50%甲醇中的溶解度。
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