主题：【第六届原创】果汁中柠檬酸的测定-高效液相色谱法

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发表于：2011/08/02 13:07:18 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

果汁中柠檬酸的测定-高效液相色谱法

唐玉萍

1　范围

本非标方法规定了果汁中柠檬酸液相色谱测定方法

本非标方法适用于果汁中柠檬酸含量的测定。

2　规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3　原理

样品经处理后，液相色谱柱分离，紫外检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。

4　试剂和材料

本标准所用水均为蒸馏水.

4.1　磷酸：优级纯。

4.2　氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.01mol/L]:准确称取0.4g氢氧化钠，用水稀释并定容至1000ml。

4.3　磷酸二氢钾（KH₂PO₄）水溶液（0.02mol/L）：称取2.7218g KH₂PO₄，用水定容至1000 ml，用磷酸（4.1）pH调2.9，经0.45μｍ微孔滤膜过滤。

4.4　无水柠檬酸：优级纯

4.5　柠檬酸储备溶液：称取无水柠檬酸0.05 g，精确至0.0001g，用氢氧化钠溶液（4.2）溶解并定容至50 ml，此溶液含柠檬酸1g/L。

5　仪器

5.1　高效液相色谱仪：配有紫外检测器。

5.2　流动相真空抽滤脱气装置及0.2μｍ或0.45μｍ微孔膜；

5.3　分析天平：感量0.0001g。

5.4　离心机，100ml的离心管。

6　试样的处理、制备和保存

6.1　试样的制备

称取10.00g样品于100ml容量瓶中，加水定容，混匀。

6.2　试样的保存

将试样于4℃冷藏箱保存。

7　测定步骤

7.1色谱条件

a) 色谱柱：Alltech Apollo C18，尺寸¢4.6mm´150mm，粒径5µｍ，或相当者；

b) 柱温：室温；

c) 流动相：0.02ｍol/L KH₂PO₄,pH2.9(3.3)；KH₂PO₄:甲醇=95：5

d) 流速：0.5ml/min；

e) 紫外检测器：检测波长，214nm；

f) 进样量：5μL；

7.2 标准曲线的绘制

柠檬酸标准系列溶液：分别吸取0.00，0.50，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00mL柠檬酸标准储备溶液(4.5)，加入到10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度分别为0.0g/L，0.05g/L，0.10g/L，0.20g/L，0.40g/L，0.60g/L，0.80g/L系列标准溶液。根据标准溶液的浓度和峰面积进行回归，绘制标准曲线，以保留时间为定性依据。

7.3 样品提取

吸取6.1制备好的试样80ml于离心管中，以8000转/min离心25分钟，吸取上清液经0.45μｍ微孔膜过滤后供液相色谱分析。

7.4 测定

7.4.1定性测定

根据标准品的保留时间定性样品中柠檬酸的色谱峰，根据样品的峰面积，查标准曲线得出柠檬酸含量。

7.4.2 定量测定

本方法采用外标法定量。

7.5 平行试验

按以上步骤对同一样品进行平行试验测定。

7.6 空白试验

除不加试样外，按上述测定步骤进行。

7.7 结果计算

样品中柠檬酸的含量按式（1）计算

X=cⅹ …………………………………(1)

式中：

X-样品中柠檬酸的含量，单位为克每升（g/kg）；

c-从标准曲线求得测定溶液中柠檬酸的含量，单位为克每升（g/L）；

100-样品的定容体积。(mL)

10-样品的称样量。(g)

测定结果保留两位有效数字。

7.8 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。

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