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毛细管电泳（CE）

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主题：【求助】关于毛细管激光诱导荧光的问题

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guodongshan

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发表于：2011/08/02 12:54:58 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

大家好，我最近在做毛细管激光诱导荧光的实验，做了许久了，发现基线始终是上下波动的比较厉害，就只看到了溶剂峰，看不到样品峰，请教各位同学一下，怎样使基线变得平稳一些，不胜感谢！

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2011/8/3 9:47:06 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

首先确定样品有没有荧光，在此体系中能不能出峰，或者迁移时间够不够。

基线不稳，是不是跟现在室温，湿度有关系。

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guodongshan

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2011/8/3 14:56:10 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 userwzy(userwzy) 发表:
首先确定样品有没有荧光，在此体系中能不能出峰，或者迁移时间够不够。

基线不稳，是不是跟现在室温，湿度有关系。

你好，请问你做激光诱导荧光的时候，基线怎么样，稳定吗？？能否发一张图来看一下，不胜感谢！！

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viernes

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2011/8/26 20:47:03 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 guodongshan(guodongshan) 发表:
大家好，我最近在做毛细管激光诱导荧光的实验，做了许久了，发现基线始终是上下波动的比较厉害，就只看到了溶剂峰，看不到样品峰，请教各位同学一下，怎样使基线变得平稳一些，不胜感谢！

LIF应该要比UV基线平很多才是，你这样问别人没有办法帮你解决问题的

你要写清楚你的样品 BGE
分离电压进样条件
激光波长

最好能附一张谱图

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20040902

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2011/9/17 20:11:24 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

溶剂要确保处理好，我的都是用0.22微米的滤膜过滤的；
避光是否好（若是在现成的电泳仪上做应该不用考虑），外界光的干扰很大；
你的基线走的时间有多长，时间长一些看会不会好一些；
奇怪的是，你的样品峰竟然没有，你还是现检查一下你的样品有没有问题吧。

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elvisnoxug

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2011/10/29 20:52:10 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 viernes(viernes) 发表:
原文由 guodongshan(guodongshan) 发表:
大家好，我最近在做毛细管激光诱导荧光的实验，做了许久了，发现基线始终是上下波动的比较厉害，就只看到了溶剂峰，看不到样品峰，请教各位同学一下，怎样使基线变得平稳一些，不胜感谢！

LIF应该要比UV基线平很多才是，你这样问别人没有办法帮你解决问题的

你要写清楚你的样品 BGE
分离电压进样条件
激光波长

最好能附一张谱图

为什么说LIF的基线比UV的平？
我的印象中LIF觉得没有UV稳定，UV是最稳定的检测器了吧。
谢谢

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nini2006

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2011/11/5 1:31:39 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

基线是否稳定不在检测器，在于毛细管双电层的状态还有buffer或者样品本身。UV看起来基线稳定，是因为波长自动选择的关系（PDA检测器）。影响基线不稳的原因很多：①毛细管内径选择（内径大→电流大→焦耳热大→基线不稳），②电压太高（→电流过大→焦耳热大→基线不稳），③运行前毛细管的冲洗不够（你可以适当延长氢氧化钠的冲洗时间试试），④你的buffer不稳定（modifier不稳定，比如一些有机物，容易被电解啥的），⑤buffer或样品有气泡（跑CE前先超声一下吧），⑥样品不稳定（运行过程中被电解，那就没办法咯），……

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