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毛细管电泳（CE）

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主题：【已应助】有做单抗CE-SDS分析的大侠吗？几个问题求教

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zyma_100

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发表于：2014/07/21 09:27:39 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

先上beckman试剂盒说明书上的两张图

还原条件

非还原条件

几个疑问，大家一起来讨论下

1 非还原条件下并没有加入巯基乙醇，为什么还会出个和还原条件下差不多大小的巯基乙醇峰呢？

2 资料说明NG=非糖基化重链，那非还原条件下NG是否应该更准确的表达为非糖基化的完整抗体？

3 按理说NGHC（非糖重链）和 NG-IgG（非糖完整抗体）含量应该相当，但是为何所有实验 NG-IgG含量均＞NGHC？

附件：

IgG purity.pdf

推荐答案：Insm_af467669回复于2022/10/03

CESDS更新图，还原和非还原是两种不同的处理方式，还原法重链和非还原法的主峰纯度上没有必然联系

该帖子作者被版主 nini2006加 5积分， 2经验，加分理由：发帖

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2014/7/21 21:13:40 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

回复你的问题，如下：

1。根据我手头的资料，MT10.5min的位置并没有标注任何说明。见附件P31-P32。事实上这个位置也不是巯基乙醇。

2。非还原条件下的NG准确表达为非糖基化的抗体蛋白。（即完整抗体蛋白切除糖基后的产物，注意这里已经不是完整抗体蛋白了）

3。你是通过绝对峰面积比较的吧？这里NG-IgG的含量确实应当与NGHC相当，你需要采用校正峰面积（即峰面积/迁移时间）来比较。

附件：

A51967(1).pdf

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2014/7/22 10:53:20 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 CEcret(v2812644) 发表:
回复你的问题，如下：

1。根据我手头的资料，MT10.5min的位置并没有标注任何说明。见附件P31-P32。事实上这个位置也不是巯基乙醇。

2。非还原条件下的NG准确表达为非糖基化的抗体蛋白。（即完整抗体蛋白切除糖基后的产物，注意这里已经不是完整抗体蛋白了）

3。你是通过绝对峰面积比较的吧？这里NG-IgG的含量确实应当与NGHC相当，你需要采用校正峰面积（即峰面积/迁移时间）来比较。

十分感谢，看来Beckman的资料还是需要改进的