主题:【分享】显微镜基础知识介绍

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(二)、扫描电子显微镜

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图2-17 扫描电子显微镜



  扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM,图2-17、18、19)于20世纪60年代问世,用来观察标本的表面结构。其工作原理是用一束极细的电子束扫描样品,在样品表面激发出次级电子,次级电子的少与电子束入射角有关,也就是说与样品的表面结构有关,次级电子由探测体收集,并在那里被闪烁器转变为光信号,再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强度,显示出与电子束同步的扫描图像。图像为立体形象,反映了标本的表面结构。为了使标本表面发射出次级电子,标本在固定、脱水后,要喷涂上一层重金属微粒,重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。

  目扫描电镜的分辨力为6~10nm,人眼能够区别荧光屏上两相距0.2mm的光点,则扫描电镜的最大有效放大倍率为0.2mm/10nm=20000X。
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图2-18 光学显微镜、TEM、SEM成像原理比较


图2-19 人类血细胞SEM照片

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(三)、扫描隧道显微镜

  扫描隧道显微镜(scanning tunneling microscope,STM)由Binnig等1981年发明,根据量子力学理中的隧道效应而设计。当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时,此处电子云重叠,外加一电压(2mV~2V),针尖与样品之间产生隧道效应而有电子逸出,形成隧道电流。电流强度和针尖与样品间的距离有函关系,当探针沿物质表面按给定高度扫描时,因样品表面原子凹凸不平,使探针与物质表面间的距离不断发生改变,从而引起电流不断发生改变。将电流的改变图像化即可显示出原子水平的凹凸形态。扫描隧道显微镜的分辨率很高,横向为0.1~0.2nm,纵向可达0.001nm。它的优点是三态(固态、液态和气态)物质均可进行观察,而普通电镜只能观察制作好的固体标本。

  利用扫描隧道显微镜直接观察生物大分子,如DNA、RNA和蛋白质等分子的原子布阵,和某些生物结构,如生物膜细胞壁等的原子排列。
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三、显微操作技术


图2-20 显微操作/注射仪



  显微操作技术(micromanipulation technique)是指在高倍复式显微镜下,利用显微操作器(micromanipulator,图2-20)进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置。

  显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。细胞核移植技术已有几十年的历史,Gordon等人(1962)对非洲爪蟾进行核移植获得成功。我国著名学者童第周等在鱼类细胞核移植方面进行了许多工作,并取得了丰硕成果。
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