头像更新中,请稍候…回复于2011/10/01
1. 极限一直提倡的是“正向使用,反向冲洗”,这么做的理由,月旭官方在各种贴子里也强调过多次,原因是:“色谱柱两端的筛板是一致的”。
2. 已经得出“色谱柱柱前段被污染”的结论,说明污染物很强大,能够“穿透”预柱/保护柱,这种情况,想要把柱子救活,概率不会很大。不管怎么说,如果是售后“保质期”内,寄回厂家要求厂家帮忙处理一般是可行的。如果不是,按照传统方法,首先反向冲洗(别扯再生,很少听到有再生成功的,不过倒是可以走走这个程序),如果不行,柱子基本没得救了。那就大胆地拆开,取下筛板进行处理(比如甲醇、异丙醇、15%硝酸超声);另外,如果柱前段能肉眼可见被污染(比如发黄发黑),可以抠掉部分填料,用相同填料进行填补,这是最后的办法。不过这么做,就算修好了,寿命也不会很长。
有使用如此强大污染力的样品的勇气,就应该有报废柱子的思想准备和重新购买色谱柱的能力,呵呵
先把答案顶上。。
小卢应该持续关注这个贴子啊
版主不在,答题的人会比较迷惘
arvid2007回复于2011/10/01
可以反冲,极限色谱柱里没有两端筛板不对称的情况,所以极限色谱柱都能反冲
一般的正相反相柱应该都能反冲,只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲,不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉,反冲后还是正着用比较好,以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的是:正向使用,反向冲洗。
dahua1981回复于2011/10/01
极限色谱柱可以反向冲洗吗?原因是?
答:极限的是可以反向冲洗的。由于两端的筛板是一致的。
如果色谱柱柱前段被污染,解决办法有哪些呢?
答:解决办法有清洗和再生。
清洗的方法:
1、经过等度运行后的色谱柱,有时用90~100%含量的溶剂B(双溶剂反相系统中洗脱能力较强的溶剂,如甲醇、乙晴、四氢 呋喃等)冲洗20个柱体积可以清除污染物(色谱柱的柱体积和空柱管体积概念不同,一根4.6x250mm柱子的柱体积只有2.5ml,4.6x150mm是1.5ml,2.1x150mm是0.28ml,4.6x50mm是0.5ml,3.0x150mm是0.64ml)。
2、如果使用的是缓冲盐系统,不要直接切换到强溶剂,突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲盐沉淀,这样会导致更大的问题,如柱头筛板堵塞、连接管路堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲盐流动相(即把缓冲液换成水),冲洗5~10个柱体积以后才切换到用强溶剂清洗。
3、有时候,强溶剂B也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么就需要用更强的溶剂或者是系列溶剂组合。如果污染物不是生物质的,一种强溶剂或几种溶剂组合清洗基本能解决问题。柱子生产厂家的网页和产品说明书上很多也有清洗方法推荐。
4、所有的清洗方法的模式普遍都类似,溶剂系列中所用溶剂的强度逐级增加,最后一个溶剂往往是非极性(疏水性)很强的(如醋酸乙酯甚至是烷烃),以便于溶解脂质、油类等非极性污染物。溶剂系列中每个溶剂都保证能与下一个溶剂互溶。整个清洗过程结束后,在回到原来的流动相体系前,必须借助一个中等强度的互溶性非常好的溶剂过渡。例如, 异丙醇是一个非常好的过渡溶剂,它既能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大,必须确保较低的流速以免使泵压过高。还有,如果使用紫外检测器,须避免选用在紫外区域有吸收的溶剂,要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。
5、对于典型的硅胶基质键合反相柱,在未使用缓冲溶液的条件下,推荐使用以下清洗溶剂系列: 100%甲醇---100%乙晴---75%乙晴/25%异丙醇---100%异丙醇---100%二氯甲烷---100%正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积,对于250mm×4.6mm的分析柱,合适的冲洗流速是1~2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡,然后回到原来的流动相体系(但不含缓冲盐),最后回复到起始流动相配置。四氢呋喃也是另外一种常用的清洗溶剂。如果怀疑柱子被严重污染,还可用二甲亚砜(DMSO)或 二甲基甲酰铵和水按50:50的比例混合,以低于0.5ml/min的流速冲洗色谱柱。
再生方法
1、再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的,利用简单的清洗步骤来除去这些污染物往往就能恢复其色谱性能。成功再生反相柱子是一个非常耗时的过程,溶剂冲洗序列可以编成一个梯度洗脱的程序自动进行,以方便过夜操作。
还有一个老问题就是冲洗再生色谱柱是正冲还是反冲。污染物是在柱子入口端聚积,反向冲洗当然是把污染物洗出柱子最方便的。现在的色谱柱,高压填充的柱床很稳定,无须担心反冲会冲坏柱子的问题。但如果碰到厂家在入口端使用孔径相对较大筛板的情况,就不能反冲。另外冲洗柱子时通常不连接检测器。柱子冲洗频率取决于有多少污染物通过进样带到柱子里了,一般反相柱,在分离度完全丧失或者洗脱出不相关的物质峰之前,还是能承受相当程度的污染的,很多人倾向于等到有上述异常现象出现后,再进行清洗柱子,这样做,污染物累积程度高了,清洗起来也困难得多。所以,如你的反相柱经常进样很脏的样品,建议你定期做个清洗。清洗次数越多,每次清洗越容易。
原文由 快乐(ynsfeed) 发表:
极限色谱柱可以反向冲洗吗?原因是?
答:极限的是可以反向冲洗的。由于两端的筛板是一致的。
如果色谱柱柱前段被污染,解决办法有哪些呢?
答:解决办法有清洗和再生。
1、再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的,利用简单的清洗步骤来除去这些污染物往往就能恢复其色谱性能。
2、经过等度运行后的色谱柱,有时用90~100%含量的溶剂B(双溶剂反相系统中洗脱能力较强的溶剂,如甲醇、乙晴、四氢 呋喃等)冲洗20个柱体积可以清除污染物(色谱柱的柱体积和空柱管体积概念不同,一根4.6x250mm柱子的柱体积只有2.5ml,4.6x150mm是1.5ml,2.1x150mm是0.28ml,4.6x50mm是0.5ml,3.0x150mm是0.64ml)。 3、如果使用的是缓冲盐系统,不要直接切换到强溶剂,突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲盐沉淀,这样会导致更大的问题,如柱头筛板堵塞、连接管路堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲盐流动相(即把缓冲液换成水),冲洗5~10个柱体积以后才切换到用强溶剂清洗。 4、有时候,强溶剂B也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么就需要用更强的溶剂或者是系列溶剂组合。如果污染物不是生物质的,一种强溶剂或几种溶剂组合清洗基本能解决问题。柱子生产厂家的网页和产品说明书上很多也有清洗方法推荐。
5、所有的清洗方法的模式普遍都类似,溶剂系列中所用溶剂的强度逐级增加,最后一个溶剂往往是非极性(疏水性)很强的(如醋酸乙酯甚至是烷烃),以便于溶解脂质、油类等非极性污染物。溶剂系列中每个溶剂都保证能与下一个溶剂互溶。整个清洗过程结束后,在回到原来的流动相体系前,必须借助一个中等强度的互溶性非常好的溶剂过渡。例如, 异丙醇是一个非常好的过渡溶剂,它既能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大,必须确保较低的流速以免使泵压过高。还有,如果使用紫外检测器,须避免选用在紫外区域有吸收的溶剂,要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。
6、对于典型的硅胶基质键合反相柱,在未使用缓冲溶液的条件下,推荐使用以下清洗溶剂系列: 100%甲醇---100%乙晴---75%乙晴/25%异丙醇---100%异丙醇---100%二氯甲烷---100%正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积,对于250mm×4.6mm的分析柱,合适的冲洗流速是1~2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡,然后回到原来的流动相体系(但不含缓冲盐),最后回复到起始流动相配置。四氢呋喃也是另外一种常用的清洗溶剂。如果怀疑柱子被严重污染,还可用二甲亚砜(DMSO)或 二甲基甲酰铵和水按50:50的比例混合,以低于0.5ml/min的流速冲洗色谱柱。 7、成功再生反相柱子是一个非常耗时的过程,溶剂冲洗序列可以编成一个梯度洗脱的程序自动进行,以方便过夜操作。
8、还有一个老问题就是冲洗再生色谱柱是正冲还是反冲。污染物是在柱子入口端聚积,反向冲洗当然是把污染物洗出柱子最方便的。现在的色谱柱,高压填充的柱床很稳定,无须担心反冲会冲坏柱子的问题。但如果碰到厂家在入口端使用孔径相对较大筛板的情况,就不能反冲。另外冲洗柱子时通常不连接检测器。柱子冲洗频率取决于有多少污染物通过进样带到柱子里了,一般反相柱,在分离度完全丧失或者洗脱出不相关的物质峰之前,还是能承受相当程度的污染的,很多人倾向于等到有上述异常现象出现后,再进行清洗柱子,这样做,污染物累积程度高了,清洗起来也困难得多。所以,如你的反相柱经常进样很脏的样品,建议你定期做个清洗。清洗次数越多,每次清洗越容易。