主题:【原创】每周一毒贴之---真菌毒素专题(1)黄曲霉毒素

浏览0 回复25 电梯直达
imtoxiner
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
写在最前面的话:注册这个名(imtoxiner)有近10个月了,一直觉得对不起这个名字,今天我终于鼓足了勇气来证明一下,我还是很毒的(但是不狠毒的毒哦),毒素的----毒(toxin)

             
每周一毒贴之真菌毒素专题-(1)黄曲霉毒素

  1、黄曲霉毒素基本信息介绍

    黄曲霉毒素是由黄曲霉
Aspergillus flavus和寄生曲霉Aspergillus parasiticus在一定的温度、湿度条件下产生的真菌毒素。黄曲霉毒素是世界卫生组织癌症研究机构划定的1类致癌物质(记住了,很毒的哦)。黄曲霉毒素是由一组大约18B1B2G1G2M1M2P1H1Q等)种类似结构的相关的真菌代谢产物组成(很牛啊,有18种之多)。植物来源的食物及中草药通常只污染B1B2G1G2M1 M2
是从牛奶中分离出来的,而这两种黄曲霉被认为是来源于饲料。附图为黄曲霉毒素的照片(下,左图,看着就比较恐怖,是不是?





农业食品方面:黄曲霉毒素主要污染花生、玉米、棉籽、禽蛋、肉、奶及奶制品,其次是小麦、高粱和甘薯,大豆粕等。

药用植物方面:主要污染陈皮、神曲、白芍、胖大海、酸枣仁、桃仁、等……动物药主要为僵蚕,最新的研究发现土鳖虫也容易污染黄曲霉毒素;2010
版中国药典规定陈皮、僵蚕、胖大海、酸枣仁、桃仁五种药材需要检测黄曲霉毒素(有个ppt上总结的污染的情况比较好,借来一用,请见上右图



2、  结构及理化性质

黄曲霉毒素的的基本结构为二呋喃环和香豆素,几种主要的黄曲霉的结构式如下图(本人以前年轻的时候自己画的,不知道有没有什么地方有问题,大家帮看看哦,好像是少了一个
M2黄曲霉毒素难溶于水、己烷、乙醚和石油醚,易溶于甲醇、乙醇、氯仿和二甲基甲酰胺等有机溶剂。分子量为312 - 346 ,熔点为200 - 300℃,黄曲霉毒素耐高温,加热很难破坏其结构。



3、  对人体的危害(不说了,反正是很毒)

4、  检测方法

4.1、提取、净化与富集

提取:粉碎后甲醇-水提取,其他提取系统包括乙腈-水,氯仿-水系统,提取方式摇床震摇,高速匀质,超声提取都有用过,高速匀质比较快一点,有优势(这是我自己总结的哦)。

净化与富集:早期采用液液萃取发,后逐渐被固相萃取法取代,C18,硅胶,Florisil硅土以及有装有极性、非极性、离子交换等混合填料的商品化柱子如Mycosep226净化柱,M-160多功能净化柱等。

免疫亲和柱由于其特异性吸附的原理,有非常高的回收率及非常好的检测限,是近年来发展最快的一种黄曲霉毒素的净化技术,国内外众多的厂家都有商品化的免疫亲和柱上市(艾杰尔,有的)

典型的免疫亲和柱净化-
高效液相检测的使用方法如下图所示(提取液的比例还得自己去试验或者参考标准,不一定非是70%甲醇哦)



感谢原作者提供使用免疫亲和柱方法示意图

4.2、检测方法:

检测方法很多,薄层色谱法,酶联免疫法,分光光度法,金标试纸,生物传感法以及液相色谱法等等。

大多数人可能只用过HPLC法,由于AF具有较强的紫外吸收和产生荧光的特性,因此可以进行HPLC-紫外或荧光检测,但是同时黄曲霉毒素中的B1,G1由于其荧光强度比较弱一并且在含水的流动相中容易产生荧光淬灭(这个具体的概念我也说不完整,反正就是灵敏度不行啦)。

因此在很多的实验中都会采用衍生法测定黄曲霉毒素,衍生的方法也很多:有柱前的,柱后的,在线的

柱前衍生一般采用三氟醋酸(TFA)衍生,柱后衍生一般采用碘化(2010版药典就是碘衍生法)或者溴化,还有采用在线的光化学衍生的,在线衍生的装置在跟大家说一下(据说就是一个紫外灯在里面照射的哦,详情不是很了解,因为没用过

借用一个本版版主的图片(感谢版主允许我引用此案例),黄曲霉标准品图(B1、B2、G1、G2),酸枣仁加样回收图谱及操作详情请参加下述链接。

链接:
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100810/2710731/

黄曲霉毒素免疫亲和柱(艾杰尔),色谱柱:Venusil MP C18 (4.6*150mm, 5μm)



5、黄曲霉毒素相关标准

乱七八糟的找了一些,部分打包供下载(见下图,感谢标准提供者某某某

国内:药典限量标准:B1含量≤ 5μg/kg ,总量≤ 10μg/kg

GBT 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定

牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定 液相色谱-荧光检测法 GB/T 23212-2008

食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定GB 5009.24-2010

食用植物油卫生标准 GB 2716-2005

食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定  GB 5009.24-2010

据说国外是欧盟最严格
B1含量≤ 2μg/kg ,总量(B1,B2,G1,G2)≤ 4μg/kg




6、展望:多种黄曲霉同时检测、新型方法如在线衍生,质谱同时定性定量检测是发展趋势,快速检测也是一个趋势,由于其毒性强烈,自动化固相萃取设备在黄曲霉毒素前处理中也会有较好的应用前景,此外,中药黄曲霉毒素也将越来越受到重视……

7、附------2010版药典 黄曲霉毒素检验法(文字版)

附录Ⅸ V 黄曲霉毒素测定法

    本法系用高效液相色谱法(附录ⅥD)侧定药材 饮片剂制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉毒B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计),除另有规定外,按下列方法测定。

    色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-乙腈-水(10:18:42)为流动相,流速每分钟0.8ml;采用柱后衍生法检测。衍生溶液为0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加人甲醇100ml使溶解,用谁稀释至1000ml制成),衍生化泵流速每挣钟0.3ml衍生化温度70℃;以荧光检测器检测,激发波长λex=360nm(或365nm),发射波长λem=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

    混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混和标准品(黄曲霉毒B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0ug/ml、0.3ug/ml、1.0ug/ml、0.3ug/ml)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为储备液。精密量取储备液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得。

    供试品溶液的制备 取供试品粉末约15g(过二号筛),精密称定,加氯化钠3g,置于均质瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000转/分钟),离心5分钟(离心速度2500转/分钟),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45um)滤过,量取续滤液20.0ml,通过免疫亲和柱(AflaT-est@P),流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用适量甲醇洗脱,收集洗脱液,置2ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀。即得。

    测定法  分别精密吸取上述混和对照品溶液5ul、10ul、15ul、20ul、25ul,诸如 液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲线,另精密吸取上述供试品溶液20-25ul,注入液相色谱仪,测定峰面积,从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量,计算,即得。

    【附注】 (1)本实验应有相应的安全、防护措施,并不得污染环境。

(2)残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿,应置于专用贮存容器(装有10%次氯酸钠溶液)内,浸泡24小时以上,再用清水将玻璃器皿冲洗干净。

谢谢,每周一毒贴之真菌毒素专题-(1)黄曲霉毒素---------------------完,有不当之处敬请补充修正

鉴于近期的黄曲霉毒素事件,很多地方都在做M1的快检,简单跟大家讨论一下酶联免疫法的原理(个人见解)

酶联免疫法是采用免疫原理进行(黄曲霉毒素分析)的方法之一。

      具体的方法是:讲酶标记在抗体/抗原之上,形成酶标抗原/抗体,在抗原与抗体形成复合物之后,酶会与加入的底物作用食指显色,根据颜色深浅,定性或者定量抗体或者抗原。

为您推荐
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
专属顾问快速对接
立即提交
可能感兴趣
foodsafety2008
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
展望写的很好,这么毒的东西,确实应该自动化萃取,不要手动操作啦,太恐怖了,艾杰尔有全自动固相萃取仪哦!
imtoxiner
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 foodsafety2008(foodsafety2008) 发表:
展望写的很好,这么毒的东西,确实应该自动化萃取,不要手动操作啦,太恐怖了,艾杰尔有全自动固相萃取仪哦!

谢谢,这部分确实是本人原创的,呵呵
binbao
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
jhsdbarry
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
顶帖,写的也比较容易叫人看懂,而且不是太繁琐,但是很详细
xiongbb
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
imtoxiner
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
谢谢楼上的几位,给了我继续写下去的勇气和力量,呵呵
zyc689
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
这个写的不错,有点像篇综述,俺以前也做个过毒素的哦,只是做的展青霉素,没做过黄曲霉
imtoxiner
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 zyc689(zyc689) 发表:
这个写的不错,有点像篇综述,俺以前也做个过毒素的哦,只是做的展青霉素,没做过黄曲霉

看到您的回复,我这就真不敢写关于展青霉素的帖子了!!
诚挚的邀请您为我们写一个展青霉素的专题,在之后的两道三周之内,也在这共享出来???
zjzy
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
imtoxiner
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
谢谢大家支持,接触过的,没接触过的,都支持一下我的帖子,别让沉下去,我这是一系列的关于毒物的帖子呢
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
品牌合作伙伴