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主题：【分享】液相色谱柱使用注意事项和维护

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maggiebird
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发表于：2012/01/10 11:57:17 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
新柱的评价与使用

重视说明书：

    a. 注意事项（Yes or No）

        如机械强度、化学稳定性、保存条件等

        最大耐受压力（～400 bar）
        pH值范围（～1.5-10 or ～2-8...）
        最大使用温度（～60-70℃）

b. 测试报告COA：
    保存溶剂、出厂测试条件、谱图

新柱使用前很有必要做柱效测试！

柱效测试的重要性（合格性鉴定）：
a，评判新柱是否达到出厂要求
b，检测系统是否正常
c，只做过柱效测试的色谱柱易更换
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2012/1/10 11:58:34 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱效测试评判方法：

  采用与出厂报告完全一致的条件和标准样品。
下图为CNW Athena C18-WP测试报告

结果比较：
1. 基本一致
    考虑系统因素，塔板数相差15%以内可看作正常
          如250*4.6mm，5um的C18色谱柱，
              COA甲苯理论塔板数为24471，实测21000。
2. 不一致：大部分原因是系统问题，少数是 柱子问题（考虑到运输等原因）
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2012/1/10 12:09:00 Last edit by maggiebird
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2012/1/10 12:09:44 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
开始使用：
    a. 流动相与保存溶剂相匹配：
        反相条件
          1. 流动相没有添加剂，如甲醇或乙腈与水的混和溶剂：
      可直接换成流动相
          2. 流动相有添加剂，如缓冲盐：
          先换成不含缓冲盐的流动相，再换成有缓冲盐的流动相
      例如：流动相为乙腈:磷酸盐缓冲液（60:40），
                      先用乙腈:水（60:40）过度
        正相条件
        多数可直接换成流动相
   
    b. 流动相与保存溶剂不匹配（需换相）：
      需用异丙醇完全过渡
    例如：氨基柱多数保存于正相条件，如正己烷:异丙醇（100:1），
      先用100%异丙醇过渡，再用反相流动相平衡。         

    c. 特殊柱子按照说明书要求操作
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2012/1/10 12:11:08 Last edit by maggiebird
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2012/1/10 12:13:02 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
液相色谱柱的维护：

清洗：
用最强流动相来冲洗掉保留过强的杂质，最后保存于厂商建议的溶剂中。

注意：有缓冲盐的流动相需要先用90-95%的水相去除缓冲盐

再生(包括正反两种顺序)：

硅胶柱：
  正己烷 ←→二氯甲烷←→异丙醇

硅胶基质非极性键合相
  C18, C8, C4, C2, C1, Phenyl, CN, NH2：
  95%水/ 5%乙腈(甲醇)←→乙腈 (甲醇)←→ THF
   
    含蛋白污染物：B从10％到90％的梯度
                            A=0.1％TFA水溶液
                            B=0.1％TFA乙腈溶液

硅胶基质极性键合相：CN，NH2，DIOL
    氯仿←→异丙醇←→二氯甲烷←→庚烷

离子交换柱：SCX, SAX
    一般采用高浓度(1-2molL)的NaCl溶液
   
    # 油脂等杂质可用低浓度碱溶液(如0.1molL的NaOH溶液)冲洗
    # 酸性有机物用低pH缓冲液冲洗
    # 碱性有机物用高pH缓冲液冲洗,
      再用蒸馏水←→甲醇←→二氯甲烷冲洗。
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2012/1/10 12:13:54 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议清洗柱子的其他条件：

溶剂体积：推荐使用柱体积的10-20倍

流速：推荐使用常规流速的1/5-1/2

不同流动相转换：推荐换相时浓度梯度由小到大

清洗时请与检测器断开

必要时可反冲 
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1818
xyhdcm2002
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2012/1/10 12:31:26 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
氨基柱呢？如何处理与应用
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2012/1/12 12:13:39 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 1818(xyhdcm2002) 发表:
氨基柱呢？如何处理与应用


大多数品牌的氨基柱出厂都是保存在正相条件里的，所以首先做柱效测试时需要在正相条件下做，如果OK，那么再开始考虑使用。

1. 在正相条件下使用：可以直接换成流动相。

2. 在反相条件下使用：需要换相，先用异丙醇过渡，然后再用反相流动相平衡。换相需要时间，才能达到色谱柱的完全平衡，所以要耐心点哦，不然换不好可能会对色谱柱有损伤。另外要注意的是换相前要把系统里面的溶剂全部换成异丙醇后，再接上色谱柱平衡。
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happy爱米粒
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2012/1/12 18:53:44 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对于一些正相柱，可能经验少一些，需要增进了解
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maggiebird
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2012/1/13 12:44:12 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
正相柱实际用到的没有反相柱多，相对于流动相这些也都比反相柱简单。

欢迎大家有任何问题都来提一下，我们一起讨论解决。
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999youran
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2014/5/24 16:07:28 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢楼主的分享，很不错 值得收藏
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xiaoxu
xufangdan
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2014/5/28 9:00:27 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家买来的新柱子都需要评价，吗
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