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主题：【分享】色谱柱柱效N的估算

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发表于：2012/03/09 20:30:52 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一根新的色谱柱在使用前大家有木有做柱效测试呢？都是怎么做柱效测试的呢？是按部就班的按照说明书方法测试吗?如果达不到指标您是怎么做的呢？是否会因为担心不符合要求而退货呢？
下面是摘自John W.Dolan著作中关于简单的色谱柱柱效估算的方法

尽管随同色谱柱而来的资料，一根5um dp的色谱柱柱效可能为80,000/m，而3um dp的色谱柱为100,000/m，不要在你的方法上寻求这样的柱效。生产商在非常仔细控制的条件下，用那些例如甲苯、甲基苯甲酸之类能够提供理想的色谱行为的样品，对色谱柱进行测试。而一个用于分析血液、猪肥肉里残留的药物的或者是合成中间体的方法，样品的色谱行为并不能象那些物质一样的理想。当谈及如何判断一个峰是否过于宽时，作者提到了一个真实的化合物合理的色谱性能的指标的估计方法： N≈3000L/dp 其中L是色谱柱的长度（cm），dp是填料的直径（um），如果得到的理论塔板数与此估计值偏差大约20％的时候，不必担心柱效。例如，一根长15cm，5um dp C18色谱柱可能不会达到约9000以上的柱效，尽管它的生产商可能报告N的数值大约为12,000。

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2012/3/9 22:54:05 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

对于柱效都是在最有条件下测得的平时很难达到所以验收时不必过分强求

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2012/3/10 13:12:31 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

液相色谱柱柱效测试方法

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]仪（美国Waters），包括600E四元泵、DEGASSER脱气机、2707自动进样器、2489

紫外检测器；
Milli-Q超纯水仪（美国Milli-Pore公司）。
乙苯，色标，中西集团；苯甲酸甲酯，色标，中西集团；
乙腈，色谱纯，"

>Merk试剂公司；正己烷，色谱纯，国药集团化学试剂公司；乙酸乙酯，色谱纯，Fisher试剂公司；超纯水，Milli-Q超纯水仪制备。

1.2实验方法

1.2.1柱效测试液的配制
用微型移液枪移取50µL乙基苯和10µL苯甲酸甲酯于10mL容量瓶中，用乙腈定容，过0.45µm滤膜，即得反相色谱柱柱效测试液。用微型移液枪移取50µL乙基苯和10µL苯甲酸甲酯于10mL容量瓶中，用正己烷定容，过0.45µm滤膜，即得正相色谱柱柱效测试液。

1.2.2色谱条件

(1)反相色谱柱柱效测试色谱条件

流动相：60%乙腈-40%水；

流速：1.0 mL﹒min-1；

进样体积：10μL。

柱温：室温；

检测波长：UV254nm；

(2)正相色谱柱柱效测试色谱条件

流动相：90%正己烷-10%乙酸乙酯；

流速：1.0 mL﹒min-1；

进样体积：10μL。

柱温：室温；

检测波长：UV254nm；

1.2.3实验过程

待系统平衡好后，进样采集数据后进行积分处理。

2实验结果

2.1色谱图采用反相色谱柱柱效测试方法测试WATERS Xterra RP18柱的柱效，采集的色谱图见图">1。

图1WATERS Xterra RP18柱柱效测试色谱图采用正相色谱柱柱效测试方法测试AGILENT Carbohydrate柱（氨基柱）的柱效，采集的色谱图见图2。

图2AGILENT Carbohydrate柱柱效测试色谱图

2.2柱效计算采用软件自带的数据处理功能对上述色谱图进行积分处理，并根据以下公式计算各组分峰的柱效：计算结果分别见表1和表2。

表1WATERS Xterra RP18柱效测试结果

组分	保留时间	面积	峰高	塔板数(N)
乙基苯	3.483	3410367	422732	4216.2
苯甲酸甲酯	5.960	5131259	472002	6798.5

表2AGILENT Carbohydrate柱效测试结果

组分	保留时间	面积	峰高	塔板数(N)
乙基苯	2.204	6691937	1156673	3282.6
苯甲酸甲酯	3.364	3581786	538812	5792.5

备注：一般柱效达2000以上即可很好的定量。

3讨论

n 在色谱系统安装不同的色谱柱后，采集乙基苯（0.5% v/v）和苯甲酸甲酯（0.1% v/v）混合样品的色谱图，并计算色谱柱柱效的方法是一种通用型色谱柱柱效测试法，不仅适用于反相键合相色谱柱，而且适用于正相键合相色谱柱；

n 对反相色谱柱，建议以乙腈－水混合溶液做洗脱剂，本例采用60%乙腈－40%水混合溶液；对于正相色谱柱，建议以正己烷－乙酸乙酯混合溶液做洗脱剂，本例采用90%正己烷－10%乙酸乙酯混合溶液；

n 本测试结果不能用于新购色谱柱性能达标与否的判据，可用于跟踪色谱柱使用一段时间后性能变化情况。若要判定新购色谱柱性能是否达标，请按照色谱柱供应商提供的方法进行测试。

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2012/3/10 13:14:35 Last edit by gl19860312

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2012/3/12 21:00:25 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

刚发现的迪马的资料，呵呵，惊喜相似，稍有不同更新一下

一、了解色谱柱之前的情况并判断色谱柱是否正常

二、将检测结果小心保存，当实验过程中发现异常时，再检测柱效进行对比，来进一步排查原因

三、按照色谱柱检测报告方法测试色谱柱，由于色谱系统有差异，您的测试结果可能与色谱柱厂家实验室得到的结果有所差异，一般来说，变化小于20%可归因于仪器的不同

四、理论塔板数可使用下面的公式估算：

N=3500L/dp

L 代表柱长，单位是 cm；dp 代表填料粒径，单位是 μm。

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