主题：【讨论】提问帖（3.30）：液相压力升高都有什么原因造成的？柱子堵了会是什么原因造成的？

液相色谱柱压力升高原因
　　1、样品的沉淀

　　当溶解样品的溶剂与流动相不一致时，样品进入色谱柱，有时可能因溶解度降低而沉淀出来，造成压力升高。

　　2、溶质吸附

　　当溶质在柱子上有较强的吸附，且所用的流动相难以将它们洗脱时，累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大和压力升高。

　　3、压力脉冲

　　运行过程中，有时会产生系统内压力的突然升降。如此所形成的压力脉冲会造成多孔填料的崩坏和柱床结构的微小变化，填料微屑的长期积累也可能会使柱床阻力增大，造成压力升高。

　　4、流动相更换过度较快

　　当改变流动相体系时，不彻底的更换使不同性质、互不混溶的流动相存在于同一个体系之中，也会造成压力升高。

　　5、流动相的前处理

　　杂质堵塞色谱柱进口滤片，导致压力升高。这往往是由于流动相没有过滤，或虽已过滤但过滤不彻底，使固体杂质滞留于滤板上所造成的。

　　6、晶体的析出

　　使用含有缓冲液的流动相时，缓冲液中的无机盐可能会残留在体系之中，它们会因在新流动相中的溶解度降低而析出，造成流体阻力加大、压力升高。

　　7、细菌或霉菌孳生

　　霉菌在流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长堵塞滤板，导致压力升高。所以在使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。

1、样品的沉淀

　　当溶解样品的溶剂与流动相不一致时，样品进入色谱柱，有时可能因溶解度降低而沉淀出来，造成压力升高。

　　2、溶质吸附

　　当溶质在柱子上有较强的吸附，且所用的流动相难以将它们洗脱时，累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大和压力升高。

　　3、压力脉冲

　　运行过程中，有时会产生系统内压力的突然升降。如此所形成的压力脉冲会造成多孔填料的崩坏和柱床结构的微小变化，填料微屑的长期积累也可能会使柱床阻力增大，造成压力升高。

　　4、流动相更换过度较快

　　当改变流动相体系时，不彻底的更换使不同性质、互不混溶的流动相存在于同一个体系之中，也会造成压力升高。

　　5、流动相的前处理

　　杂质堵塞色谱柱进口滤片，导致压力升高。这往往是由于流动相没有过滤，或虽已过滤但过滤不彻底，使固体杂质滞留于滤板上所造成的。

　　6、晶体的析出

　　使用含有缓冲液的流动相时，缓冲液中的无机盐可能会残留在体系之中，它们会因在新流动相中的溶解度降低而析出，造成流体阻力加大、压力升高。

　　7、细菌或霉菌孳生

　　霉菌在流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长堵塞滤板，导致压力升高。所以在使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。

柱子堵得原因
1流动相对样品溶解性欠佳，样品析出
2生物类样品前处理欠佳，在色谱柱中聚拢
3色谱柱柱头筛板毁坏，样品杂质颗粒聚拢
4色谱柱填料装填欠佳，部分永久性坍塌
5.流动相不干净

一、液相色谱柱压力升高原因
　　1、样品的沉淀
　　当溶解样品的溶剂与流动相不一致时，样品进入色谱柱，有时可能因溶解度降低而沉淀出来，造成压力升高。
　　2、溶质吸附
　　当溶质在柱子上有较强的吸附，且所用的流动相难以将它们洗脱时，累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大和压力升高。
　　3、压力脉冲
　　运行过程中，有时会产生系统内压力的突然升降。如此所形成的压力脉冲会造成多孔填料的崩坏和柱床结构的微小变化，填料微屑的长期积累也可能会使柱床阻力增大，造成压力升高。
　　4、流动相更换过度较快
　　当改变流动相体系时，不彻底的更换使不同性质、互不混溶的流动相存在于同一个体系之中，也会造成压力升高。
　　5、流动相的前处理
　　杂质堵塞色谱柱进口滤片，导致压力升高。这往往是由于流动相没有过滤，或虽已过滤但过滤不彻底，使固体杂质滞留于滤板上所造成的。
　　6、晶体的析出
　　使用含有缓冲液的流动相时，缓冲液中的无机盐可能会残留在体系之中，它们会因在新流动相中的溶解度降低而析出，造成流体阻力加大、压力升高。
　　7、细菌或霉菌孳生
　　霉菌在流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长堵塞滤板，导致压力升高。所以在使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。

二、柱子堵得原因
1流动相对样品溶解性欠佳，样品析出
2生物类样品前处理欠佳，在色谱柱中聚拢
3色谱柱柱头筛板毁坏，样品杂质颗粒聚拢
4色谱柱填料装填欠佳，部分永久性坍塌
5.流动相不干净
6.长时间使用缓冲盐但冲洗不干净

造成柱压升高的可能原因有很多。一般是由于色谱柱筛板或柱头发生了堵塞，造成流动相阻力加大所引起。当然色谱系统其他部分发生堵塞，也可能表现为柱压（系统压力）升高。所以在发现系统压力升高时，可首先使用两通短接色谱柱观察相同条件下系统本压是否正常，排除压力升高为系统其他部分造成。

² 色谱柱筛板堵塞，这往往是由于流动相没有过滤，或虽已过滤但滤膜孔径过大或滤片损坏，使固体杂质滞留在筛板上造成的。可采用反冲的方法去除堵塞物。对于5 或3.5um填料的色谱柱，建议采用0.45um 膜厚过滤样品，1.8um 填料的色谱柱，请采用0.2um膜厚过滤样品。

同样类似堵塞也会发生于排气阀过滤芯、在线过滤器和保护柱，这时建议更换滤芯，在线过滤器内的筛板或保护柱内的柱芯。

² 非特异性吸附 当部分组分在柱子上有较强的非特异性吸附，且当前所用的流动相难以将它们洗脱时，强保留组分的累积则会造成阻力增大和压力升高。可使用适当的溶剂冲洗以除去吸附物质。

² 样品的沉淀 当样品所用的溶剂与流动相不一致时，样品进入柱中时有可能因溶解度降低而沉淀出来，造成压力升高。此时建议使用对样品有较高溶解度的溶剂冲洗。

² 盐晶体的析出 使用较高浓度的缓冲液或添加有缓冲液的流动相后，如果冲洗不彻底，缓冲液中的无机盐成分可能会残留在体系之中。它们会因在新流动相体系中溶解度降低而析出，造成流动相阻力加大，压力升高。

² 更换流动相时置换不彻底 当改换流动相体系时，不彻底的更换使不同性质、互不相溶的流动相存在一个体系中，也会造成压力升高。可使用混溶的溶剂（异丙醇）彻底冲洗。

柱子堵塞解决方法汇总
1、先把柱子卸下来看看柱压，如果压力升高是柱子引起的处理柱子，如果柱子卸下来柱压还是挺高那么就不是你的柱子的柱压高，而是别的地方有堵塞。柱子柱压高时可以先用含水比例较大的系统冲一下，要是系统中有盐析出而导致的柱压升高时这样应该可以使柱压适当的降低；冲完后若柱压还是没有降低可用适当比例的异丙醇冲洗，利用异丙醇的粘度冲出系统中的析出物质。
2、将柱子反接，用10%~90%的甲醇冲洗，10%几甲醇保留10倍柱体积，90%至少保留10倍柱体积。冲完后用50：50=乙腈：异丙醇冲洗至少10倍柱体积。可以在甲醇和水中考虑加入0.1%的甲酸。我也碰到过这种情况，就这样冲了大概半天，好了。幸亏安捷伦的柱子还可以，不然柱子早报销了。
3、首先，你应该确定一下你的柱子用了多长时间，柱子在使用的过程中柱压逐渐升高是正常的现象，你的柱子柱效也在下降，有可能是正常的使用损坏，首先使用甲醇－水梯度洗脱几个小时，如果没有效果，可尝试倒过来用甲醇－水梯度冲洗，一般可以解决。
4、第一要检查是柱子的原因还是系统的原因，可以换跟新的柱子试试或者在另一台液相上用你的柱子测一下压力，从而可以检查是哪个出了问题。
第二如果是柱子那就用甲醇低速冲洗。
第二如果是系统的问题可能是有沉淀的无机盐，可以换上二通，用60°的水把系统冲洗。
第三柱效低可以用甲醇和乙腈换着冲洗，注意要低速，可以在一定程度上提高柱效。
建议一般要准备一根状态较好的柱子作为备用，可以在出问题时进行检查。
以上回答希望能有帮助。
5、首先要确定柱压高是柱子的原因，而不是系统其他原因；
如果确定是柱子原因，建议用异丙醇冲下试试;
"峰型比以前也胖了点",可能是你的柱子柱效有所下降。
6、不光要看你的流动相，还要看看你的样品做什么，生物样品还是普通样品，要是生物样品建议用乙腈冲洗看看，虽然现在乙腈的价格是飙涨，要是还有盐的样品也还是要用高比例的水冲洗的。
异丙醇建议用比例低点的水溶液即可，异丙醇的黏度非常大，压力会比较高，不要用太大的流速。
反冲的问题不到最后一步不要用，对柱子还是有一定的损伤的。
7、柱压高有许多原因，要是柱子里有脏东西，可以用甲醇多冲没也可以将柱子反接用甲醇冲洗。还可以先超声一下，再冲洗。要看具体的原因了。
8、进样管路堵塞：卸下进样阀和柱子之间那根细管丝，放入异丙醇中（浸没），超声1小时以上。
柱子堵塞：用异丙醇，低流速，低压力，倒着冲洗。
9、用甲醇和乙腈冲一段时间·····十几个小时再看看
实在不行就把前端柱子拆开挖掉一点填料，建议以后用的时候最好用一个预柱，这样柱子一般不会出问题了。
10、柱压高时，冲柱子千万要注意，不用二氯甲烷，含氯的溶剂的比重大，容易破坏柱子里的结构，还有能用甲醇就不要用乙腈冲，因为纯乙腈冲新柱子还可以，如果是根老柱子，时间长了，纯乙腈容易对管道有溶解作用，造成柱压不稳，我用的岛津以前就是这样，咨询了岛津的工程师才发现最好少用纯乙腈的。

液相色谱仪最常见的故障一是堵，二是漏。
“堵”的原因之一：配制流动相时细菌污染。

首先我们要认识到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排除，真正容易引起问题的，是水中的细菌。
“堵”的原因之二：使用流动相时的细菌污染。

指的是：流动相刚开始没有长菌，在使用时却产生了细菌污染。这主要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。
"堵”的原因之三：不适当操作。

常见问题的有以下几种：

（1）在更换零件时选择的型号有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。

（2）样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间形成阻塞不畅。

（3）在使用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的原因，转动的不到位，于是造成流路形成了死堵，压力快速升高超过警戒值。

（4）在使用金属管路作出废液管时，应当注意最好废液瓶中先放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且实验使用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时可能在出口端结晶成块并造成堵塞。这种情况不常见，但却的确发生过。

如果发现压力偏高，不要立即认为“柱压高了”，因为系统压力通常由柱前
压力、色谱柱压力和流通池压力加合而成

为什么柱压会过高？
1色谱柱入口筛板堵塞
2不可逆吸附（化学污染）
3在线过滤器或保护柱堵塞
4管线堵塞
5流动相粘度过高
6盐/缓冲液沉淀
7聚合物色谱柱溶剂改变导致溶胀
8细菌生长
9压力传感器不准确
10流速是否错误

柱子堵得原因
1流动相对样品溶解性欠佳，样品析出.
2生物类样品前处理欠佳，在色谱柱中聚拢.
3色谱柱柱头筛板毁坏，样品杂质颗粒聚拢.
4色谱柱填料装填欠佳，部分永久性坍塌 .