主题：【转帖】分离的细菌如何鉴定?

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发表于：2012/04/24 09:01:58 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

问:分离的细菌如何鉴定?

答:细菌的传统鉴定

1. 形态特征及染色结果 ①革兰氏染色 ②鞭毛染色 ③荚膜染色 ④细胞壁染色（NaCl法：1.取1d25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。

2.挑一环培养6h的细菌在25%的NaCl中涂匀，自然凉干。3.滴加0.01%的结晶紫于其上，30s后水洗干燥，油镜观察。） ⑤抗酸染色 2. 培养特征观察取菌龄24-28h的菌3.6接种于PDA平板，PDA斜面，营养肉汤中培养24h，进行琼脂柱，明胶穿刺培养，30℃培养24h。

3. 生理生化实验需氧性测定和运动性测定：将斜面培养24h的待测菌用接种针穿刺到培养基管底，3d后观察变化。如果菌落沿培养基表面生长，表明为好氧菌，反应为阳性，如果菌落沿穿刺线生长，反应为阴性。培养基成分：蛋白胨0.2g，NaCl0.5g，K2HPO40.2g，琼脂0.5-0.6g，葡萄糖1.0g，水100ml。 4. 生长温度测定在肉汤培养基（外加1%葡萄糖）中用接种针接种，在恒温水浴锅中不同温度下（4℃，10℃，15℃，20℃，25℃，30℃，35℃，40℃，45℃，50℃，55℃）下培养2-5d观察生长情况，测定OD值，做温度曲线，确定最适生长温度，最高生长温度和最低生长温度。

5. PH测定在肉汤培养基（外加1%葡萄糖）中分别用HCl，NaOH调PH3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，10.0吸取定量的24h培养汤28℃培养24h，测培养液的OD值，做PH曲线。

6. 耐盐实验采用PDA液体培养基，分别加入NaCl，分别配成0%，5%，7%，10%的系列浓度，采用直针接种，28℃培养7d，在第三天和第七天各观察一次菌株生长情况。

7. 采用西蒙斯氏柠檬酸盐培养基（NaCl0.5g，MgSO4●7H2O0.02g，（NH4）2HPO40.1g，柠檬酸酸钠0.02g，琼脂1.2g，蒸馏水100ml，溴百里酚兰少量，斜面接种并设空白对照，28℃培养7d，观察显色情况。

8. 接触酶试验将待测菌菌株在PDA斜面上28℃培养24h，滴入10%H2O2，观察有无气泡产生。

9. 脲酶试验将待测菌接种于PDA斜面，在3，7天进行脲酶产生测定。方法：在空试管中，将斜面菌台做成菌悬液，加一滴酚红指示剂，调PH到7，即酚红刚刚转黄呈橙黄色，再将此菌液分做2份，在其中一管中加入少量的晶体尿素（约0.05g-0.1g），另一管不加尿素作对照，观察显色情况。

10. 糖，醇类发酵试验培养基：（NH4）2HPO40.1g，MgSO4●7H2O0.02g，酵母浸膏0.02g，琼脂0.5-0.6g，葡萄糖0.1g，水100ml。秀甲酚紫少许中加入1%甘油，木糖，三梨醇，蔗糖，甘露醇，阿拉伯糖代替葡萄糖。将斜面培养24h的待测菌穿刺到上述培养基上培养5d，观察培养基的变化情况。

11.V-P试验于液体培养基（蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，NaCl0.05g，蒸馏水100ml，PH7.0-7.2）中接种待测菌菌株，2d后取出培养液和40%NaOH等体积混合，加入少量肌酸猛烈震荡3Min后，观察培养液的颜色变化。

12.硝酸盐还原试验将待测菌接种于硝酸盐液体培养基（肉汁胨培养基1000ml，KNO310g，PH7.0-7.2）2管做空白对照，培养2d后，取2支干净的空试管倒入少许培养液，各滴入1dA液（对氨基苯磺酸0.5g，10%稀醋酸150ml）及B液（ā-萘胺0.1%，蒸馏水20ml，10%稀醋酸150ml）对照管中同样加入A，B液各一滴，观察颜色变化。

13.淀粉水解将培养基（肉汁胨中加入2%的可溶性淀粉）倒成平板，倒置过夜后，接种新鲜的菌种，28℃培养48h，待形成菌落后，滴加2滴碘液于菌落周围，观察菌落周围培养基颜色的变化。

14.明胶液化培养基（蛋白胨0.5g，明胶10-15g，蒸馏水100ml，PH7.2-7.4）取24h培养菌穿刺接种，设空白对照于20℃培养箱中培养，观察明胶的液化情况。

15.H2S试验产生试验培养基（蛋白胨1g，NaCl0.5g，牛肉膏0.75g，明胶10-12g，FeCl2微量，水100g，PH7.0）穿刺接种，30℃培养观察培养基的颜色变化。

16.M.R.试验（甲基红）培养基（蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，NaCl0.05g，水100ml，PH7.0-7.2）接种待测菌菌株于培养基中30℃培养6天，在培养液中加入一滴甲基红试剂，观察颜色变化。

17.纤维素分解实验采用蛋白胨液体培养基接种待测菌，同时浸泡一条灭菌的优质新化滤纸，观察1-4周滤纸片的变化情况。

关键词：细菌鉴定

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