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主题：【求助】HPLC图谱中出现鼓包

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hmhcpu
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发表于：2012/06/25 22:41:44 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近在做一化合物的HPLC，出现了以下的现象，百思不得其解，望能有高手指点。



（1）化合物为盐酸盐，当流动相为水-0.1%甲酸-乙腈系统时，HPLC图谱中出现两个峰，且两峰比例在刚配完样进样分析时约为15:85，之后一直稳定在25:75。为什么会出现两个色谱峰呢？



（2）同一化合物，当流动相为醋酸铵溶液（0.1%三乙胺，pH=6.2）-乙腈时，HPLC图谱如下，出现一个鼓起来的峰，对应空白溶剂中没有该峰，这个鼓包该如何解释呢？可能是由什么引起的呢？




希望大家帮忙对以上两个现象进行分析讨论指点，万分感谢啊！！！
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2012/6/26 7:54:53 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
检测波长是多少，分析的是纯品还是其它样品？首先可以确定组分在你的前处理过程和两种流动相中是稳定的吗，均是等度洗脱吗，感觉上是流动相没有选择正确，可能受PH影响比较大，再调试一下，由于不知道组分的理化性质，难以提出什么建议。
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sssshine
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2012/6/26 9:31:34 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感觉还是流动相的问题！
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pandora98
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2012/6/26 11:28:52 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.样品中含两个组分，其中一个组分极性很大，在酸性流动相中以离子形式存在，没有保留。所以图1中在死体积位置出峰。
2.在醋酸氨溶液中，极性很大的组分依然保留较差，在死体积之后紧跟着系统峰，但是因为溶剂效应，该物质表现为一个鼓包带一个小峰。尝试用大比例的水稀释样品可以解决这个问题。
该帖子作者被版主 zhaohua8011加 2积分， 2经验，加分理由：有道理鼓励
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kevinlee0121
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2012/6/26 16:38:50 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果别的所有条件都固定不变的话，感觉很有可能是流动相的原因，比如添加剂的因素；当然也不能排除样品中成分，毕竟不同的添加剂还是有不同的效果的。
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liboygg
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2012/6/27 8:46:14 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我想知道楼主用的是什么色谱柱，楼主柱子的固定相和样品存在较强的保留，同时这种保留受流动相极性的影响很大。
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houjjun
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2012/6/27 10:27:26 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能是流动相的问题，检测一下PH值对不对
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hu446273027
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2012/6/27 22:20:20 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是手动进样还是自动进样
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hmhcpu
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2012/6/27 23:23:59 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
检测波长是多少，分析的是纯品还是其它样品？首先可以确定组分在你的前处理过程和两种流动相中是稳定的吗，均是等度洗脱吗，感觉上是流动相没有选择正确，可能受PH影响比较大，再调试一下，由于不知道组分的理化性质，难以提出什么建议。


检测波长是210nm，样品是纯品。现在我们分析到，样品在酸性条件下，存在一个化学平衡的现象，所以会出现两个色谱峰，因此我们准备放弃酸性的流动相体系。我们又尝试了不同pH的流动相体系，结果是这样的：pH=4时，结果与甲酸的图谱类似；pH=5和7时，都有鼓包，且pH=7时的鼓包形状与pH=6.2时一致，与pH=5时不一致（因图谱上传不上去，我只能文字描述）。希望指教，谢谢！
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hmhcpu
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2012/6/27 23:24:49 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hu446273027(hu446273027) 发表:
是手动进样还是自动进样


自动的
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hmhcpu
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2012/6/27 23:26:55 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liboygg(liboygg) 发表:
我想知道楼主用的是什么色谱柱，楼主柱子的固定相和样品存在较强的保留，同时这种保留受流动相极性的影响很大。


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