额外提示:
用SR6溶液洗脱RNA以后,离心柱滤膜还有DNA在。你可以用含有高浓度盐的SR8溶液(DNA Elution Accessory Kit 组分)把基因组DNA洗脱下来。因为整个核酸提取过程动作相对温和,可以获得更大分子量的DNA。阴离子交换离心柱的又一优势在于,可以从同一个样品中先后提取到RNA和DNA。
再一个额外提示:RNA稳定性和土样保存
关于采样后土样中RNA的稳定性,以及RNALater的使用。事实上RNALater并不兼容土壤。用RNALater在不同温度和时间下对土壤RNA的保护试验,结果发现随着保存时间的延长,RNALater会令土样释放出更多的腐植酸,粘附在RNA上与RNA共同吸附于阴离子交换离心柱滤膜上难以去除。保存的时间越长,样品颜色变得越深。
采样时使用LifeGuard Soil Preservation Solution 对土壤RNA进行保护,并且在运输过程中能保证微生物结构稳定不变。
总结:Summary
最具挑战性的样品提取就是土壤RNA。样品中RNA非常不稳定、含量很低,而且存在大量抑制因子和微生物源RNase。但是获得高得率干净RNA还是可以做到的。