试剂的配制
1. 种子液(1000ml, pH7.0):
Trypton 16g
Yeast Extract 10g
Glycerol 20ml
NaCl 5g
2. 发酵液(600ml):
Trypton 50g
Yeast Extract 50g
Glycerol 100ml
MgSO4·7H2O 3g
3. 补料(2400ml):
Trypton 200g
Yeast Extract 100g
Glycerol 1000ml
MgSO4·7H2O 12g
4. 盐(1000ml,pH7.2):
KH2PO4 20g
K2HPO4 40g
Na2HPO4·12H4O 70g
(NH4)2SO4 12g
NH4Cl 0.2g
仪器
Biostat 5L自动发酵罐,德国B.Braun公司。
操作步骤
1. 消毒所有试剂、管路等。
2. 发酵罐消毒。
3. 发酵用菌种筛选 取-70℃保存的甘油菌种划平板,37℃培养过夜,挑取单菌落于5ml试管中,振荡培养至A6000.6左右,按20ml/L接种于含种子液的500ml摇瓶中,振荡培养至对数中期,作为发酵罐的种子液。
以上环节应该在实验进行前准备好。
4. 打开仪器,调节相应的参数。
5. 在发酵罐中加入发酵液、盐。
6. 将种子液按40ml/L接种至发酵罐,控制适当范围的参数:溶氧为≥30%;温度为37℃;pH值设定为7.0,流加300ml/L的氨水以保持恒定。
7. 当发酵密度到一定范围的时候(溶氧开始上升)。
8. 诱导目的蛋白表达。
9. 收集菌体
10. 清洗发酵罐,关闭仪器。