(Cleanert PAX,P/N:AX0100)
1 实验部分
1.1仪器与试剂
仪器:L6-1 系列高效液相色谱仪,三聚氰胺检测样品前处理方法包:(包括盐酸0.1 mol/L,6% 磺基水杨酸,混合型阴离子交换填料Cleanert PAX,(科技部“十一五”国家支撑计划成果, 天津博纳艾杰尔科技有限公司);Venusil SCX-M,5μm,4.6×250mm 强阳离子交换色谱柱(科技部“十一五”国家支撑计划成果, 天津博纳艾杰尔科技有限公司)及保护柱;针式过滤器(Agela Clarinert,0.22/0.45µm,尼龙);三聚氰胺标准品(>99%),均质器(T25 Basic,IKA)。试剂:所用乙腈为色谱纯;磷酸二氢钾为分析纯;水为超纯水。
1.2 色谱条件
色谱柱:Venusil SCX-M色谱柱,4.6×250mm,5μm,300 ;(科技部“十一五”国家支撑计划成果);流动相:磷酸二氢钾(0.050mol/L):乙腈=70:30;流速:1.5mL/min;柱温:室温;波长:240 nm;实验中若非特别注明,进样量均为20μL。 Å
1.3 三聚氰胺标准曲线工作液的配制
1.3.1三聚氰胺标准贮备溶液:1.00×103 mg/L。
称取100 mg 三聚氰胺标准物质(准确至0.1 mg),用水完全溶解后,用水定容至100 mL,混匀。
1.3.2标准工作溶液
1.3.2.1 标准溶液A:2.00 ×102 mg/L。准确移取20.0 mL 三聚氰胺标准贮备溶液(1.3.1),置于100 mL 容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,待用。
1.3.2.2 标准溶液B:0.50 mg/L。准确移取0.25 mL 标准溶液A(1.3.2.1),置于100 mL 容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,待用。
1.3.2.3 标准工作液的配制 按表1 分别移取不同体积的标准溶液A(1.3.2.1)于容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,0.45μm滤膜过滤,待测。按表2分别移取不同体积的标准溶液B(1.3.2.2)于容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,0.45μm滤膜过滤,待测
表1 标准工作液配制(高浓度)
标准溶液A体积(mL) | 0.1 | 0.25 | 1.00 | 1.25 | 5.00 | 12.5 |
定容体积(mL) | 100 | 100 | 100 | 50 | 50 | 50 |
标准工作液浓度(mg/L) | 0.20 | 0.50 | 2.00 | 5.00 | 20.0 | 50.0 |
标准溶液B体积(mL) | 1.00 | 2.00 | 4.00 | 20.0 | 40.0 |
定容体积(mL) | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
标准工作液浓度(mg/L) | 0.005 | 0.01 | 0.02 | 0.10 | 0.20 |
1.4 试样的制备
1.4.1牛奶样品
取15.0g牛奶置于25mL容量瓶中,加入0.1mol/L 盐酸10mL,加入6% 磺基水杨酸3.0 mL, 混合型阴离子交换树脂1.0g(Cleanert PAX),用0.1mol/L 盐酸定容至25mL,涡旋振荡2min,8000 r/min离心5min,取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。
1.4.2鸡蛋样品
取10.0g混合均匀的鸡蛋置于25mL容量瓶中,加入0.1mol/L 盐酸10mL,均质后全部转入25mL容量瓶,加入6% 磺基水杨酸3.0mL,混合型阴离子交换树脂1.0g(Cleanert PAX),用0.1mol/L 盐酸定容至25mL,涡旋振荡2min,8000 r/min离心5min,取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。
1.4.3鱼肉样品
取5.0g剁碎的鱼脊背肉,加入0.1mol/L 盐酸10mL,均质后全部转入25mL容量瓶,加入6% 磺基水杨酸3.0 mL,混合型阴离子交换树脂1.0g(Cleanert PAX),用0.1mol/L 盐酸定容至25mL,涡旋振荡2min,8000 r/min离心5min,取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。
2结果与讨论
2.1 线性范围
低浓度曲线取0.005mg/L, 0.01mg/L, 0.02mg/L, 0.1mg/L, 0.2mg/L 5个浓度的标准样品测试,所得标准曲线如下图:
图1 低浓度标样线性
高浓度曲线取0.2mg/L, 0.5mg/L, 2mg/L, 5mg/L, 20mg/L, 50mg/L 6个浓度的标准样品测试,所得标准曲线如下图:
图2 高浓度标样线性
结果表明:本方法在0.005mg/L~ 50.0mg/L和范围内,三聚氰胺峰面积和浓度有良好的线性关系
2.2 重复性
取浓度为5mg/L的标准品溶液,分别进样20μL,进样6次,计算保留时间及峰面积的RSD(相对标准偏差)。结果列于表3中
表3 保留时间和峰面积的重现性(精密度)
1# | 2# | 3# | 4# | 5# | 6# | 平均值 | RSD% | |
保留时间min | 6.817 | 6.833 | 6.817 | 6.817 | 6.858 | 6.808 | 6.825 | 0.26 |
峰面积 μAu·s | 571360 | 574492 | 569813 | 572187 | 574525 | 575593 | 572995 | 0.39 |
图3 重复性谱图
从表3和图3看出,该方法结果重复性良好。
2.3 检出限
以曲线最低点0.005mg/L的谱图(见图4)为准,以噪声对应峰高估算检出限为0.0032mg/L (S/N=3)。
图4 检出限谱图
2.4 实际样品测试
2.4.1牛奶样品
2.4.1.1空白牛奶样品测试谱图如图5:
图5 空白牛奶样品谱图
2.4.1.2 牛奶加标回收率
分别在空白牛奶样品中加入相当于1.0mg/Kg,5.0mg/ Kg和10.0mg/ Kg的三聚氰胺标准品,测试谱图如图6所示。
图6牛奶中添加不同浓度的三聚氰胺谱图
根据此谱图测得三聚氰胺的加标回收率如表4所示
表4 牛奶中三聚氰胺加标回收率试验结果
样品名称 | 加标量(mg/Kg) | 测得量(mg/ Kg) | 回收率(%) |
牛奶空白 | 0.00 | - | - |
1# | 1.00 | 1.05 | 105.0% |
2# | 5.00 | 5.18 | 103.6% |
3# | 10.00 | 9.04 | 90.4% |
结果表明,MAS前处理方法对牛奶中三聚氰胺提取具有良好的回收率,杂质去除效果好;HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。
2.4.2鱼肉样品
2.4.2.1 空白鱼肉样品测试谱图如图7:
图7 空白鱼肉样品谱图
2.4.2.2 鱼肉样品加标回收率
分别在空白鱼肉样品中加入相当于1.0mg/kg、5.0mg/kg和10.0mg/kg的三聚氰胺标准品,测试谱图如图8和图9所示。
图8 鱼肉中添加三聚氰胺1.0 mg/kg谱图
图9 鱼肉中添加三聚氰胺10.0 mg/kg谱图
根据此谱图测得鱼肉中三聚氰胺加标回收率如表4所示
表5 鱼肉中三聚氰胺样品加标回收率试验结果
样品名称 | 加标量(mg/kg) | 测得量(mg/kg) | 回收率(%) |
鱼肉空白 | 0.00 | - | - |
1# | 1 | 0.98 | 98.0% |
3# | 5 | 5.81 | 116.2% |
5# | 10 | 9.67 | 96.7% |
结果表明,MAS前处理方法对鱼肉中三聚氰胺提取具有良好的回收率,杂质去除效果好;HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。
2.4.3鸡蛋
2.4.3.1空白鸡蛋样品测试谱图如图10所示:
图10 空白鸡蛋样品谱图
2.4.3.2 鸡蛋加标回收率
分别在样品中加入相当于1.0mg/Kg,5.0mg/ Kg和10.0mg/ Kg的三聚氰胺标准品,测试谱图如图11所示。
图11 鸡蛋中添加三聚氰胺5.0 mg/kg
鸡蛋中三聚氰胺的加标回收率如表6所示
表6 鸡蛋中三聚氰胺加标回收率试验结果
样品名称 | 加标量(mg/kg) | 测得量(mg/kg) | 回收率(%) |
鸡蛋空白 | 0.00 | - | - |
1# | 1 | 0.89 | 89.0% |
3# | 5 | 5.55 | 111.0% |
5# | 10 | 10.48 | 104.8% |