紫外可见分光光度计(UV)

主题:【求助】刚学紫外,有几个问题请教。

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suliaocailiao
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1、一种药物在做工作曲线的时候,先选一个该药物高浓度的溶液测试一下其吸收波长,是这样的么?

2、为什么要先测试吸收波长呢?直接做工作曲线不可以么?就是说大概知道药物的波长在200-500nm之间,直接把各个浓度的溶液扫这一段的紫外不就可以了么?

3、制备工作曲线的药物浓度如何定制,见资料上写A值应该在0.2-0.7之间,我还得挨个浓度测试一下,才能确定该浓度合适不合适?

还有的文献我看直接就是配100mg/ml的贮备液,然后吸取1、3以及5和7、9ml进行10ml定容,都是这样做么?

我就是对配工作曲线的浓度不知如何确定,在没有文献指导的情况下。

4、溶剂的选择,溶剂只要溶解药物就可以?还是说PE紫外只能用哪几种溶剂?
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tutm
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1、一种药物在做工作曲线的时候,先选一个该药物高浓度的溶液测试一下其吸收波长,是这样的么?

(这是为了找到最灵敏、干扰最少的波长来进行测试,一般是最大吸收波长。选什么浓度关系不大,只要吸光度数值合适就行。)



2、为什么要先测试吸收波长呢?直接做工作曲线不可以么?就是说大概知道药物的波长在200-500nm之间,直接把各个浓度的溶液扫这一段的紫外不就可以了么?

(同上。每次样品测试都要扫描,你不觉得麻烦?况且,使用光谱扫描方式测得的吸光度值,在准确性、重现性上均不及固定波长测试方式。)


3、制备工作曲线的药物浓度如何定制,见资料上写A值应该在0.2-0.7之间,我还得挨个浓度测试一下,才能确定该浓度合适不合适?

还有的文献我看直接就是配100mg/ml的贮备液,然后吸取1、3以及5和7、9ml进行10ml定容,都是这样做么?



我就是对配工作曲线的浓度不知如何确定,在没有文献指导的情况下。

(对于稀溶液,比如0.5g/L以下的溶液,浓度和吸光度接近线性关系,这样你只要用样品空白液为参比,测得一个已知浓度溶液的吸光度,也就可以估算出合适的浓度范围了。比如你配了一个浓度为0.01g/L的溶液,测得A=1.000,那如果你将样品减少到0.001g/L,吸光度应该会降低到0.1左右)



4、溶剂的选择,溶剂只要溶解药物就可以?还是说PE紫外只能用哪几种溶剂?

(选溶剂有几个原则,与仪器没有关系,最基本、最主要的是:

1.能很好地溶解所测样品;

2.与样品不会反应,比如水解反应;

3.在所测波长范围内没有明显的吸收,不会干扰测试对象;

4.安全,这个写起来就有点复杂了.....)
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suliaocailiao
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原文由 tutm(tutm) 发表:
1、一种药物在做工作曲线的时候,先选一个该药物高浓度的溶液测试一下其吸收波长,是这样的么?

(这是为了找到最灵敏、干扰最少的波长来进行测试,一般是最大吸收波长。选什么浓度关系不大,只要吸光度数值合适就行。)

2、为什么要先测试吸收波长呢?直接做工作曲线不可以么?就是说大概知道药物的波长在200-500nm之间,直接把各个浓度的溶液扫这一段的紫外不就可以了么?

(同上。每次样品测试都要扫描,你不觉得麻烦?况且,使用光谱扫描方式测得的吸光度值,在准确性、重现性上均不及固定波长测试方式。)


3、制备工作曲线的药物浓度如何定制,见资料上写A值应该在0.2-0.7之间,我还得挨个浓度测试一下,才能确定该浓度合适不合适?

还有的文献我看直接就是配100mg/ml的贮备液,然后吸取1、3以及5和7、9ml进行10ml定容,都是这样做么?



我就是对配工作曲线的浓度不知如何确定,在没有文献指导的情况下。

(对于稀溶液,比如0.5g/L以下的溶液,浓度和吸光度接近线性关系,这样你只要用样品空白液为参比,测得一个已知浓度溶液的吸光度,也就可以估算出合适的浓度范围了。比如你配了一个浓度为0.01g/L的溶液,测得A=1.000,那如果你将样品减少到0.001g/L,吸光度应该会降低到0.1左右)

4、溶剂的选择,溶剂只要溶解药物就可以?还是说PE紫外只能用哪几种溶剂?

(选溶剂有几个原则,与仪器没有关系,最基本、最主要的是:

1.能很好地溶解所测样品;

2.与样品不会反应,比如水解反应;

3.在所测波长范围内没有明显的吸收,不会干扰测试对象;

4.安全,这个写起来就有点复杂了.....)


非常非常感谢!!!
suliaocailiao
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还有个问题请教,工作曲线只要涵盖我要测试的浓度范围即可?
就是说在这样的条件下,我可以阶梯性的选择5个或6个浓度做工作曲线就行?
桌子下面少个八
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原文由 suliaocailiao(suliaocailiao) 发表:
还有个问题请教,工作曲线只要涵盖我要测试的浓度范围即可?

就是说在这样的条件下,我可以阶梯性的选择5个或6个浓度做工作曲线就行?


一般是让你要测的浓度落在标曲中间即可.

当然为了方便,一般曲线做到吸光度0.7左右.
小虾米
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先选一个该药物高浓度的溶液测试一下其吸收波长。

是的
lilylau
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