主题:【原创】【许愿原创】C18柱差别咋这么大【yifan1117、houjjun、dahua1981推荐】

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C18柱差别咋这么大



最近给客户检测一药品,名称是单硝酸异山梨酯,检测方法完全按中国药典的标准来做。因为是头次检测这个品

种,不知道哪根色谱柱更适合。于是按药典规定,用三个不同品牌的C18色谱柱进行测试。具体方法如下:


色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇—水(25︰75)为流动

相;检测波长为210nm。理论板数按单硝酸异山梨酯峰计算不低于3000。单硝酸异山梨酯峰与2—单

硝酸异山梨酯峰的分离度应不小于2.0。



测定法 取本品约25mg,精密称定,置25ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品

溶液。另取硝酸异山梨酯、2-单硝酸异山梨酯和单硝酸异山梨酯对照品各适量,精密称定,用流动

相溶解并制成每1ml中约含2.5μg的溶液作为对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件,取对照品溶

液20μl,注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使单硝酸异山梨酯峰的峰高为满量程的20%~25%,精

密量取供试品溶液和对照品溶液各20 μl 分别注入液相色谱仪,记录色谱图至硝酸异山梨酯峰保

留时间的1.1倍。按外标法以峰面积计算,含硝酸异山梨酯与2-单硝酸异山梨酯分别不得过0.25%,

其他单个杂质按外标法以单硝酸异山梨酯峰面积计算不得过0.25%,杂质总量不得过0.5%。

首先,我们用某国产品牌色谱柱柱(C18  5μ  250x4.6mm)测试了分离度,如图:

由上图可知:虽然单硝酸异山梨酯峰与2—单硝酸异山梨酯峰的分离度的分离度达到要

求,但是峰形较差。这样淘汰了该色谱柱。

然后,我们分别用博纳的色谱柱(Venusil x BP C18(2)  5μ  250x4.6mm  Cat.NO:

VX952505-2  S/N:V9510525BMO112b)和某国外品牌色谱柱(C18  5μ  250x4.6mm)检测

了同批样品。色谱图分别如下:

博纳的色谱柱谱图

某国外品牌色谱柱谱图

根据以上测定结果大家帮参考下,用哪根色谱柱更好些?

我写这篇文章的目的,不是说哪个色谱柱好,而是不同型号、不同品牌的色谱柱差别很

大,针对某个产品选择色谱柱时,可以进行多种尝试,总会得到比较满意的结果。并且这

根色谱柱不适合做这个样品,也许适合其他的品种。

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原文由 dahua1981(dahua1981) 发表:
工艺填料不同结果肯定也不同了


在HPLC发展初期,十八烷基硅烷(常被称为ODS或C18)是最早的键合固定相之一,也导致了“反相色谱”这个新技术的诞生。C18 成为了反相色谱的标准固定相并被大部分色谱工作者所采用。制药工业是HPLC技术的最早使用者,监管部门不想偏袒任何一家色谱柱生产厂商的品牌名字,FDA和USP编写了一套分类体系,给每一种药物应用方面的新方法一个通用名称。对HPLC色谱柱,命名为“L”,C18因为出现在大部分送审材料中,理所当然就成为了“L1”。随着另外固定相的增加,分别都有了自己的“L”序列号(如:L7是C8,L10是CN基,L11是苯基等等)。  很不幸,这个命名体系被证明是不可靠的。因为每种商品化的C18色谱柱,虽然同样是选用硅胶作为基体,但各自都有自己特定的填料键合合成工艺,因此色谱性能也不相同。
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原文由 yifan1117(yifan1117) 发表:
不错,终于有人进行比较验证了。


因为是特定的产品,有局限性。
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原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
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不错,终于有人进行比较验证了。


因为是特定的产品,有局限性。
这个理解,不同厂家还是有些差别的。
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不错,终于有人进行比较验证了。


因为是特定的产品,有局限性。
这个理解,不同厂家还是有些差别的。


同一厂家不同类型的C18柱差别也不小。
vcningmeng
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这三根柱子非常有意思,第一根柱子的进样浓度和其他2根的差别怎么这么大?
30分钟的峰怎么在BP的柱子上没有响应了?
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原文由 vcningmeng(vcningmeng) 发表:
这三根柱子非常有意思,第一根柱子的进样浓度和其他2根的差别怎么这么大?
30分钟的峰怎么在BP的柱子上没有响应了?


30分钟的峰也有,可能是积分条件设置不合理没积上。
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原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
原文由 vcningmeng(vcningmeng) 发表:
这三根柱子非常有意思,第一根柱子的进样浓度和其他2根的差别怎么这么大?
30分钟的峰怎么在BP的柱子上没有响应了?


30分钟的峰也有,可能是积分条件设置不合理没积上。


从基线和坐标的比例上来看,BP的柱子对30分钟的峰几乎没有响应啊。根据第一和第三根柱子的情况,很明显30分钟的杂质的峰面积是比第一个峰要大的,但BP的柱子几乎没有响应。

另第一根柱子进样的样品和后面两个应该是完全不一样的,根据各峰的比列就能看出来。
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