主题:【讨论】LC/MS以MRM方式扫描,二对母离子/总离子的检测限、定量限如何确定?

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园觉
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    各位老师及应用同行,在做LC/MS/MS以MRM方式扫描的时候,一般采用二对的母离子/总离子,其中一对为定量离子、一对为定性离子,假设二对母离子/子离子的峰面积(或强度)比值为10:1,请教以下:

一:一般选择峰面积大的那对离子做定量离子,还是选择峰面积小的那对离子做定量离子?

二:假设选择峰面积大的那对离子做定量离子,另一对峰面积小的离子做定性离子,检测限、定量限应如何确定?如果定性离子对S:N为3时作为检测限,这时定量离子的S:N可能为30(大于10),就会出现检测限与定量限为同一数值的情况;如果以定量离子的S:N为10作为定量限的话,这时定性离子对S:N可能小于3,出现化合物无法定性的情况,我理解的对吗?

三:此问题对于GC/MS的full scan或SIM扫描方式同样适用,正所谓一通百通。
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长江七号
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我是这么做的

以峰面积大的离子对为定量离子对

求定量限时,以定量离子对S/N=10为准

求检测限时,以定量离子对S/N=3为准
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园觉
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原文由 长江七号(nedved33) 发表:
我是这么做的

以峰面积大的离子对为定量离子对

求定量限时,以定量离子对S/N=10为准

求检测限时,以定量离子对S/N=3为准
在检测限的浓度,峰面积小的离子对检测不出来!无法定性,何谈检测限?
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2013/7/2 21:41:25 Last edit by yzp2050
yzulcl
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楼主提出的问题很有道理,相信很多人也曾经想过,不过没有像楼主这样较真而是差不多就算了就过去了。

推荐看一看 LC-MS/MS 相关的 SN/T 的检测标准,比如 SN/T 2226-2008 一文,其中的“表1”相信会给你答案的。

这个表一的来源,是欧盟的一个指令性文件 2002/657/EC
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yzulcl
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http://www.instrument.com.cn/download/shtml/242717.shtml
http://www.instrument.com.cn/download/shtml/242716.shtml

附 2002/657/EC 文件,英文版和中文版,是以前坛友分享,我保存下来的。
虽然从头到尾看过,但是也没完全看懂,主要是没好好学过统计。
园觉
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    非常感谢yzulcl 给予答复! SN/T 2226-2008 标准我下载看了,表一为“LC/MS/MS相对离子丰度最大容许误差”,这事我明白,但跟检测限、定量限有啥关系?

    欧盟 2002_657_EC的中文版与英文版我下载看了,统计的东西我看不太懂,可不可以这样理解,检测限、定量限不是用通常的S/N为3或10倍的方法确定出来的,而是应该严格按照 欧盟 2002_657_EC那一大堆统计计算做出来的,既然如此,为何各种文献大都用S/N为3或10倍来代替?
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2013/7/3 18:39:58 Last edit by yzp2050
yzulcl
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我做过检测限和定量限。

事实是,如果定量离子的信噪比刚刚好是10,此时根本满足不了表一的要求。而要想满足表一的要求,此时,定量离子的信噪比已经差不多到了50-100的范围。

也就是说,表一的要求比单纯的信噪比大于3或者大于10更苛刻。满足了表一的要求也就满足了确证检测的要求。此时的检测方法是一个确证方法。

而,一般的做方法,比如GC或者LC,只有检测器信号强度的信号,谈不上确证,因此只要信噪比达到3就能确定检出,只要信噪比达到10就能准确定量。
园觉
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原文由 yzulcl(yzulcl) 发表:
我做过检测限和定量限。

事实是,如果定量离子的信噪比刚刚好是10,此时根本满足不了表一的要求。而要想满足表一的要求,此时,定量离子的信噪比已经差不多到了50-100的范围。

也就是说,表一的要求比单纯的信噪比大于3或者大于10更苛刻。满足了表一的要求也就满足了确证检测的要求。此时的检测方法是一个确证方法。

而,一般的做方法,比如GC或者LC,只有检测器信号强度的信号,谈不上确证,因此只要信噪比达到3就能确定检出,只要信噪比达到10就能准确定量。
        如果满足了表一的要求,也就满足了确证检测的要求,此时定量离子信噪比为50-100,定性离子信噪比肯定大于3,否则也不会满足表一的要求,那这种情况下即可确证检测又可定量,检测限和定量限为同一数值,我理解的对吗?
        此时信噪比是用峰峰比还是RMS,二者数值相差近5倍?
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2013/7/4 23:07:21 Last edit by yzp2050
yzulcl
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对于信噪比的计算,一般情况下,为了与人眼视觉直观相一致,应采用峰峰比(peak-to-peak)来计算。

也有用 RMS 来计算的(因为计算机处理数据,计算 RMS 很方便,而且 RMS 的结果比较稳定,不容易受到基线上偶然的极大或极小噪音信号的影响),此时一般应该以 Noise = RMS *3 来计算,得出的结果与峰峰比的结果相差不会太大。
leonqshen
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信号强的作为定量离子对,LOD,LOQ,CCa,CCb均采用定量离子对
定性离子对只是辅证作用,不涉及具体定量过程。
兜哥
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原文由 园觉(yzp2050) 发表:
    各位老师及应用同行,在做LC/MS/MS以MRM方式扫描的时候,一般采用二对的母离子/总离子,其中一对为定量离子、一对为定性离子,假设二对母离子/子离子的峰面积(或强度)比值为10:1,请教以下:

一:一般选择峰面积大的那对离子做定量离子,还是选择峰面积小的那对离子做定量离子?

二:假设选择峰面积大的那对离子做定量离子,另一对峰面积小的离子做定性离子,检测限、定量限应如何确定?如果定性离子对S:N为3时作为检测限,这时定量离子的S:N可能为30(大于10),就会出现检测限与定量限为同一数值的情况;如果以定量离子的S:N为10作为定量限的话,这时定性离子对S:N可能小于3,出现化合物无法定性的情况,我理解的对吗?

三:此问题对于GC/MS的full scan或SIM扫描方式同样适用,正所谓一通百通。


单独选一个离子和选两个离子时对应的噪音是不一样大的吧?
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