主题：【资料】－中华人民共和国行业标准（SB/T10203—94）果汁通用试验方法 （续1）

式中：X——果汁中总酸的含量，g/100g（或g/100mL）；
      V1——样品滴定耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL；
      V0——空白试验耗用氢氧化钠标准溶液的体积，mL；
      C——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；
      m——样品的质量，g（或mL）；
      G——吸取稀液的量，mL；
      250——果汁样品定容后的总体积；
      K——换算果汁中适当酸的系数：苹果酸0.067；柠檬酸0.064；酒石酸0.075。
3．2．12  允许差
同3.2.6。
3．3  氨基态氮的测定（酸度计法）
3．3．1  原理
氨基酸分子中含有羧基，又含有氨基，加入甲醛以固定氨基，使溶液显示酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定以酸度计测定终点，根据氢氧化钠溶液的消耗量，计算出氨基态氮的含量。
3．3．2  仪器
同3.2.2。
3．3．3  试剂
3．3．3．1  0.1mol/L氢氧化钠标准溶液（按3.2.3.1配制与标定）。
3．3．3．2  0.05mol/L氢氧化钠标准溶液：用感量0.1g的天平，迅速称取分析纯氢氧化钠2g，溶于蒸馏水中，稀释到1000mL，摇匀，按3.2.3.1标定。
3．3．3．3  中性甲醛溶液：在使用前1h量取200mL甲醛溶液于400mL烧杯中，置于电磁搅拌器上，边搅拌边用1mol/L氢氧化钠溶液调至pH8.4。
3．3．3．4  pH6.88缓冲溶液（用磷酸盐标准物质直接配制）。
3．3．4  测定步骤
将酸度计接通电源，预热30min后，用pH6.88的缓冲溶液（3.3.3.4）校正酸度计。称取适量匀样（氨基态氮的含量为1~5mg）于烧杯中。将烧杯置于电磁搅拌器上，电极插入烧杯内试样中适当位置。如需要加入适量蒸馏水。开动电磁搅拌器，先用0.1mol/L氢氧化钠慢慢中和试样中的有机酸，当pH达到7.5左右时，再用0.05mol/L氢氧化钠溶液调至pH8.4，并保持1min不变。然后准确加入10mL中性甲醛溶液（3.3.3.3），再用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液（3.3.3.2）滴定至pH8.4，记录加入中性甲醛溶液后消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的毫升数。同时作空白试验。
3．3．5  结果计算
按式（4）计算氨基态氮的含量。
………………………………（4）
式中：X——果汁中氨基态氮的含量，mg/100g（或mg/100mL）；
      V0——空白试验耗用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的体积，mL；
      C——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；
      V1——加入中性甲醛溶液后，滴定试样消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的体积，mL；
      m——样品的质量，g（或mL）；
      0.014——与1mL氢氧化钠标准溶液[C（NaOH）=1.000mol/L]相当的氮的质量，g。
3．3．6  允许差
同一样品同时或连续两次测定结果的相对误差：氨基态氮≥10mg/100g，≤±2%；氨基态氮<10mg/100g，≤±5%。取两次测定的算术平均值作为结果，精确到小数点后一位。
3．4  抗坏血酸的测定（荧光法）
3．4．1  原理
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后，与邻苯二胺反应生成有荧光的化合物，其荧光强度与抗坏血酸浓度成正比，在激发波长338nm，发射波长420nm处测定。
样品中有其他荧光物质的干扰，通过加入硼酸，使脱氢抗坏血酸形成复合物，它不与邻苯二胺生成荧光化合物，而测出其他荧光杂质作为空白荧光强度加以校正。
3．4．2  仪器
3．4．2．1  荧光分光光度计
3．4．2．2  实验室常用设备
3．4．3  试剂
3．4．3．1  邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100mL。
3．4．3．2  偏磷酸-乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40mL冰乙酸及250mL水，加温，搅拌，使之逐渐溶解，冷却后加水至500mL。于4℃冰箱可保存7~10天。
3．4．3．3  0.15mol/L硫酸：取10mL硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200mL。
3．4．3．4  偏磷酸-乙酸-硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同3.4.3.2配制。
3．4．3．5  50%乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa•3H2O），加水至1000mL。
3．4．3．6  硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100mL乙酸钠溶液（3.4.3.5）中。临用前配制。
3．4．3．7  抗坏血酸标准溶液（1mg/mL）（临用前配制）：准确称取50mg抗坏血酸，用溶液（3.4.3.2）溶于50mL容量瓶中，并稀释至刻度。
3．4．3．8  抗坏血酸标准使用液（100μg/mL）：取10mL抗坏血酸标准液，用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100mL。定容前试pH值，如其pH>2.2时，则应用溶液（3.4.3.4）稀释。
3．4．3．9  0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75mL，磨溶后用水稀释至250mL。
变色范围：pH值=1.2        红色
          pH值=2.8        黄色
          pH值>4        蓝色
3．4．3．10  活性面炭的活化：取200g活性炭（粉状），加入1000mL10%盐酸溶液，加热回流1~2h过滤，用水洗至滤液中无铁离子（用硫氰酸盐确证有无铁离子存在）为止，置于110~120℃烘箱中干燥，备用。
3．4．4  测定步骤
3．4．4．1  样品液的制备：称取适量匀样（试样中含抗坏血酸浓度在40~100μg/mL）于100mL容量瓶中，加入等量的偏磷酸-乙酸溶液（3.4.3.2）。用指示剂（3.4.3.9）调试样品酸碱度。如呈红色，即可用3.4.3.2稀释，若呈黄色或蓝色，则用3.4.3.4稀释，使pH为1.2，并用（3.4.3.2）溶液稀释至100mL。
3．4．4．2  氧化处理：分别取样品液（3.4.4.1）及标准使用液（3.4.3.8）各100mL于250mL带盖三角瓶中，加2g活性炭，用力振摇1min，过滤，弃去最；妆几毫升，收集滤液，即样品氧化液和标准氧化液，待测定。
3．4．4．3  各取10mL标准氧化液于2个100mL容量瓶中，分别标明“标准”及“标准空白”。
3．4．4．4  各取10mL样品氧化液于2个100mL容量瓶中，分别标明“样品”及“样品空白”。
3．4．4．5  在“标准空白”和“样品空白”溶液中各加5ml硼酸-乙酸钠溶液混合摇动15min，用水稀释至100mL，在4℃冰箱中放置2~3h，取出备用。
3．4．4．6  于“样品”及“标准”溶液中各加入5mL50%乙酸钠溶液，用水稀释至100mL，备用。
3．4．4．7  标准曲线的制备：取上述“标准”溶液（3.4.4.6）(抗坏血酸含量10μg/mL)0.5。1.0，1.5和2.0mL标准系列，取双份分别置于10mL带盖试管中，再用水补充至2.0mL。荧光反应按3.4.4.8。
3．4．4．8  荧光反应：取（3.4.4.5）中“标准空白”和“样品空白”溶液及（3.4.4.6）中“样品”溶液各2mL，分别置于10mL带盖试管中。在暗室迅速向各管中加入5mL邻苯二胺溶液，振摇混合，在室温下反应35min，于激发波长338nm，发射波长420nm处测定荧光强度。标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标，对应的抗坏血酸含量为横