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原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:你做的哪类物质，分子量大概多少，流动相没有加其它缓冲盐吧，50:50能把样品里全部杂质都冲出来吗，在后期冲柱子的过程中有没有冲出来很多杂质呢？好奇怪原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:压力正常吗，有机相/水=1:1时，是压力最大的时候。你是反应液直接过滤进样吗，还是用其它溶剂溶解的呢？有没有试过你配制的样品在乙腈/水=1:1时的溶解度呢，有没有析出来的可能呢。原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
用过菲罗门的Luna柱，不耐乙腈，用几次乙腈水的流动相色谱柱就报废了。
luna柱是硅胶基质的色谱柱没有不耐乙腈之说啊，很多时候，比如长期在低于5%乙腈下运行，或流动相pH过酸过碱，溶解样品溶剂的pH过酸或过碱，样品在流动相中的溶解度，进样前的处理，使用后的清洗程序等因素都会影响色谱柱寿命的
流动相是乙腈：水=50:50，原料药没有前处理，进样前过滤，也不知什么原因，用几次柱效降得很厉害。
用流动相溶解，进样前过滤，应该没有析出。
原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:你做的哪类物质，分子量大概多少，流动相没有加其它缓冲盐吧，50:50能把样品里全部杂质都冲出来吗，在后期冲柱子的过程中有没有冲出来很多杂质呢？好奇怪原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:压力正常吗，有机相/水=1:1时，是压力最大的时候。你是反应液直接过滤进样吗，还是用其它溶剂溶解的呢？有没有试过你配制的样品在乙腈/水=1:1时的溶解度呢，有没有析出来的可能呢。原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
用过菲罗门的Luna柱，不耐乙腈，用几次乙腈水的流动相色谱柱就报废了。
luna柱是硅胶基质的色谱柱没有不耐乙腈之说啊，很多时候，比如长期在低于5%乙腈下运行，或流动相pH过酸过碱，溶解样品溶剂的pH过酸或过碱，样品在流动相中的溶解度，进样前的处理，使用后的清洗程序等因素都会影响色谱柱寿命的
流动相是乙腈：水=50:50，原料药没有前处理，进样前过滤，也不知什么原因，用几次柱效降得很厉害。
用流动相溶解，进样前过滤，应该没有析出。
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:我以前也是做原料药质量控制的，很多中间体在反应中会加一些金属离子，在纯化过程中不能完全除掉，不知道你的物质里面是否有。你这个真的很奇怪，还真没碰到过乙腈会对硅胶基质有害的，可能还是某一环节被我们忽视了。原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:你做的哪类物质，分子量大概多少，流动相没有加其它缓冲盐吧，50:50能把样品里全部杂质都冲出来吗，在后期冲柱子的过程中有没有冲出来很多杂质呢？好奇怪原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:压力正常吗，有机相/水=1:1时，是压力最大的时候。你是反应液直接过滤进样吗，还是用其它溶剂溶解的呢？有没有试过你配制的样品在乙腈/水=1:1时的溶解度呢，有没有析出来的可能呢。原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
用过菲罗门的Luna柱，不耐乙腈，用几次乙腈水的流动相色谱柱就报废了。
luna柱是硅胶基质的色谱柱没有不耐乙腈之说啊，很多时候，比如长期在低于5%乙腈下运行，或流动相pH过酸过碱，溶解样品溶剂的pH过酸或过碱，样品在流动相中的溶解度，进样前的处理，使用后的清洗程序等因素都会影响色谱柱寿命的
流动相是乙腈：水=50:50，原料药没有前处理，进样前过滤，也不知什么原因，用几次柱效降得很厉害。
用流动相溶解，进样前过滤，应该没有析出。
没有加缓冲盐，化药一中间体，分子量记不清了，不是很大，冲柱子没有冲出其他杂质。
原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:我以前也是做原料药质量控制的，很多中间体在反应中会加一些金属离子，在纯化过程中不能完全除掉，不知道你的物质里面是否有。你这个真的很奇怪，还真没碰到过乙腈会对硅胶基质有害的，可能还是某一环节被我们忽视了。原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:你做的哪类物质，分子量大概多少，流动相没有加其它缓冲盐吧，50:50能把样品里全部杂质都冲出来吗，在后期冲柱子的过程中有没有冲出来很多杂质呢？好奇怪原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:压力正常吗，有机相/水=1:1时，是压力最大的时候。你是反应液直接过滤进样吗，还是用其它溶剂溶解的呢？有没有试过你配制的样品在乙腈/水=1:1时的溶解度呢，有没有析出来的可能呢。原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
用过菲罗门的Luna柱，不耐乙腈，用几次乙腈水的流动相色谱柱就报废了。
luna柱是硅胶基质的色谱柱没有不耐乙腈之说啊，很多时候，比如长期在低于5%乙腈下运行，或流动相pH过酸过碱，溶解样品溶剂的pH过酸或过碱，样品在流动相中的溶解度，进样前的处理，使用后的清洗程序等因素都会影响色谱柱寿命的
流动相是乙腈：水=50:50，原料药没有前处理，进样前过滤，也不知什么原因，用几次柱效降得很厉害。
用流动相溶解，进样前过滤，应该没有析出。
没有加缓冲盐，化药一中间体，分子量记不清了，不是很大，冲柱子没有冲出其他杂质。
原文由 daisyzhangwei(daisyzhangwei) 发表:原文由 netsking(netsking) 发表:原文由 武灵(zhonghuashendun) 发表:原文由 netsking(netsking) 发表:这个流动相对色谱柱还是有影响的。原文由 有水有渝(xky0230699)
...分析条件、正规操作等都会有影响。
分析条件是梯度洗脱, 从5%到90%乙腈含0.1%FA, 柱温保持40°C. 样品浓度为10mg/ml, 过0.2 micron过滤, 进样量每次2微升.
不知道所说的正规操作指什么.
能具体一点吗? 这个条件会这么折寿吗?以前用相同的条件, 在C-18 (ODS), 4.6X250mm的上千针后,结果还可重复.
不知道你在走梯度的时候，两相都有加0.1%的FA还是？如果不是两边都加的话，在梯度变化的过程中，整个体系的pH值就一直在变化，这种情况下对柱子的寿命影响会很大，我以前就碰到过这种情况。另外，看你的样品浓度挺大的，不知道样品的溶解性会怎样。还有就是样品基质也会影响柱子的寿命。对于柱子的寿命不能一概而论啦。
原文由 netsking(netsking) 发表:我也不确定会不会是溶解度的问题，洗脱强度上虽然乙腈比甲醇强，但是从极性而言，甲醇是比乙腈要强的。你用75%的甲醇溶解样品，你样品的浓度又是10mg/mL这么大(通常要低于1mg/mL，K柱为了保持高柱效通常要更小，控制样品扩散)，而你的梯度是5%走到90%乙腈的大梯度，不敢保证这么大浓度的样品在5%乙腈处(就是柱头处)会不会有析出现象，我之前在药明做制备时，我们用乙腈体系，都不建议样品用甲醇溶解，用的话，我们都会测试其在乙腈水中的溶解度才会进样。K柱的粒径肯定比你之前用的250*4.6的C18要小，肯定会更容易堵塞，所以要更注意样品的前处理，溶解度和使用保护柱，否则寿命就会打折扣的。原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 netsking(netsking) 发表:楼长的样品配制条件是怎样的呢？原文由 有水有渝(xky0230699)
...分析条件、正规操作等都会有影响。
分析条件是梯度洗脱, 从5%到90%乙腈含0.1%FA, 柱温保持40°C. 样品浓度为10mg/ml, 过0.2 micron过滤, 进样量每次2微升.
不知道所说的正规操作指什么.
甲醇水75：25
原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 netsking(netsking) 发表:我也不确定会不会是溶解度的问题，洗脱强度上虽然乙腈比甲醇强，但是从极性而言，甲醇是比乙腈要强的。你用75%的甲醇溶解样品，你样品的浓度又是10mg/mL这么大(通常要低于1mg/mL，K柱为了保持高柱效通常要更小，控制样品扩散)，而你的梯度是5%走到90%乙腈的大梯度，不敢保证这么大浓度的样品在5%乙腈处(就是柱头处)会不会有析出现象，我之前在药明做制备时，我们用乙腈体系，都不建议样品用甲醇溶解，用的话，我们都会测试其在乙腈水中的溶解度才会进样。K柱的粒径肯定比你之前用的250*4.6的C18要小，肯定会更容易堵塞，所以要更注意样品的前处理，溶解度和使用保护柱，否则寿命就会打折扣的。原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 netsking(netsking) 发表:楼长的样品配制条件是怎样的呢？原文由 有水有渝(xky0230699)
...分析条件、正规操作等都会有影响。
分析条件是梯度洗脱, 从5%到90%乙腈含0.1%FA, 柱温保持40°C. 样品浓度为10mg/ml, 过0.2 micron过滤, 进样量每次2微升.
不知道所说的正规操作指什么.
甲醇水75：25
原文由 netsking(netsking) 发表:如果流动相能溶尽可能用流动相，这种情况使用保护柱还是必要的，换柱芯还是比换柱子要节省的多。我上学的时候也是做天然产物的，我们那时候的半制备柱和UPLC柱经常会因为每个人的使用不同寿命而有不同。原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 netsking(netsking) 发表:我也不确定会不会是溶解度的问题，洗脱强度上虽然乙腈比甲醇强，但是从极性而言，甲醇是比乙腈要强的。你用75%的甲醇溶解样品，你样品的浓度又是10mg/mL这么大(通常要低于1mg/mL，K柱为了保持高柱效通常要更小，控制样品扩散)，而你的梯度是5%走到90%乙腈的大梯度，不敢保证这么大浓度的样品在5%乙腈处(就是柱头处)会不会有析出现象，我之前在药明做制备时，我们用乙腈体系，都不建议样品用甲醇溶解，用的话，我们都会测试其在乙腈水中的溶解度才会进样。K柱的粒径肯定比你之前用的250*4.6的C18要小，肯定会更容易堵塞，所以要更注意样品的前处理，溶解度和使用保护柱，否则寿命就会打折扣的。原文由 袖剑(v2869754) 发表:原文由 netsking(netsking) 发表:楼长的样品配制条件是怎样的呢？原文由 有水有渝(xky0230699)
...分析条件、正规操作等都会有影响。
分析条件是梯度洗脱, 从5%到90%乙腈含0.1%FA, 柱温保持40°C. 样品浓度为10mg/ml, 过0.2 micron过滤, 进样量每次2微升.
不知道所说的正规操作指什么.
甲醇水75：25
谢谢你的建议。不过俺的样品不是单一成份，是很复杂的天然产物提取物，至少有上百种不同的成分。
所以每个样品的浓度都不会很高。与0.4mg/mL单一成分比，单一成份的峰高还是比10 mg/mL的高。
至于大梯度，是必须的。因为要想分离这近千种不同结构类型的成份，还真得用大梯度来覆盖不同的极性大小的成份。
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