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主题：【求助】HLB固相萃取回收率只有30％，急求帮助！

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梦歌
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发表于：2014/04/16 17:05:44 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家好，我使用OASIS HLB 3cc/60mg 小柱来做血清中PBDEs，严格按照文献方法来处理，但回收率怎么也上不去，备受煎熬啊！具体方法：

1、加标：10mL离心管中加入200uL正己烷，加入10uL的PBDE混标（100ppb），氮气吹干，加入200uL丙酮，涡旋1min，加入2mL血清，涡旋1min，超声20min，4℃平衡过夜；

2、蛋白变性：取出血清恢复至室温，加入2mL甲酸-乙腈（2:1）混合溶液，涡旋1min，超声20min，再加入2mL水稀释，准备上样；

3、固相萃取：小柱先用3mL二氯甲烷淋洗除杂，抽干柱床；再用3mL甲醇和3mL水活化；保持柱床湿润，上样，每次上样1mL，流速为3秒/滴，再用0.5mL甲酸-乙腈-水（2:1:3）溶液润洗离心管两次；用3mL5%甲醇的水溶液淋洗，2000r离心10min，抽真空30min使柱床干燥；分别用4mL和8mL二氯甲烷洗脱；

4、硅胶柱净化：用6mL空柱管自制层析硅胶柱，从下到上：1cm无水硫酸钠-1.5cm酸性硅胶-0.5cm中性硅胶-1cm无水硫酸钠；固相萃取洗脱液氮吹浓缩至干，用0.5mL正己烷复溶，上样，管子用0.5mL×2正己烷润洗；用6mL正己烷-二氯甲烷（1:1）洗脱，氮吹浓缩，转移至样品瓶，定容至40uL，进样分析。

以上是全部的前处理步骤，实在不知是哪些地方不正确导致了样品的损失，回收率离80％还有好远啊，实验压力已经非常大了，请求哪位高人帮我指点迷津，十分感谢！
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2014/5/12 8:36:09 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有国家标准、行业标准吗，最好是按照标准来开展检测，成功率会好得多。现在的文献，很多不敢相信啊，如果真的确定文献中的方法可行的话，直接找作者咨询。很多标准中的问题，我也是直接找标准制订者咨询的，他们一般都会热情解决相应问题，你不妨试试。
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2014/5/12 8:38:17 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
检测血清样品时，请注意填料的粒径。一般来说普通填料的直径（30-50）微米就可以，但是血清可能需要直径100微米以上才能得到满意结果。
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