主题:【求助】毛细管电泳分析DNA

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nini2006
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你用的是涂层毛细管么?如果不是,那么存在吸附效应的。。。


我用的是裸管,刚刚溶解的DNA相应很高,放一段时间就不行了。换了新管子也不行。


这个正是吸附作用明显的表现。尝试采用:

1. 涂层毛细管

2. 动态涂层技术

3. 极端pH,例如pH>9。
这主要是针对蛋白质。DNA的分析可用任何模式,如果是尺寸分离则需要凝胶毛细管电泳,所用的buffer通常在中性附近。当然,用CGE模式时,毛细管内壁最好键合有中性图层。
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管的问题,样品问题,条件稳定度的问题,要逐一排查


换过毛细管了,没有改善。样品是新买的。
外部条件有变?温度、湿度等……


这个就不清楚了。我现在认为是DNA本身的原因。做DNA的毛细管电泳可能需要对DNA进行处理保证稳定性。


DNA样品,只要保持样品盘控温,稳定性还是可以满足分析要求的。个人认为最重要的因素在于你采用的非涂层裸管的吸附。


我特别不明白的是DNA不是带负电吗,管壁也带负电,为什么还有吸附?这不是和极端pH的道理一样吗?

我家仪器没有控温装备

很少有见到说DNA容易吸附的说法,不过,吸附的原因除了静电作用还有可源于疏水作用和其它多种两相分配机制。
wy20071722
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管的问题,样品问题,条件稳定度的问题,要逐一排查


换过毛细管了,没有改善。样品是新买的。
外部条件有变?温度、湿度等……


这个就不清楚了。我现在认为是DNA本身的原因。做DNA的毛细管电泳可能需要对DNA进行处理保证稳定性。


DNA样品,只要保持样品盘控温,稳定性还是可以满足分析要求的。个人认为最重要的因素在于你采用的非涂层裸管的吸附。


我特别不明白的是DNA不是带负电吗,管壁也带负电,为什么还有吸附?这不是和极端pH的道理一样吗?

我家仪器没有控温装备
咦——你不是用的beckman的仪器吗?实在不行,保持空调常开,门窗紧闭,以控制温湿度。晚上停止实验的时候也不要关。


是Beckman的,但是没有配置
wy20071722
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管的问题,样品问题,条件稳定度的问题,要逐一排查


换过毛细管了,没有改善。样品是新买的。
外部条件有变?温度、湿度等……


这个就不清楚了。我现在认为是DNA本身的原因。做DNA的毛细管电泳可能需要对DNA进行处理保证稳定性。


DNA样品,只要保持样品盘控温,稳定性还是可以满足分析要求的。个人认为最重要的因素在于你采用的非涂层裸管的吸附。


我特别不明白的是DNA不是带负电吗,管壁也带负电,为什么还有吸附?这不是和极端pH的道理一样吗?

我家仪器没有控温装备


很少有见到说DNA容易吸附的说法,不过,吸附的原因除了静电作用还有可源于疏水作用和其它多种两相分配机制。


不过我知道吸附还是有的。在荧光检测器条件下,可以观察到使用裸管和涂层管电泳DNA的差别,确实还是有吸附的,在紫外条件下看不出来。
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