主题：【讨论】蔬菜中草甘膦的测定。

原文由 wjl0220(wjl0220) 发表:
大家好：

      有做草甘膦的吗？请交流一下测定方法，谢谢！

可以试试以下方法，方法中使用艾普锐的PMG草甘膦专用固相小柱，效果还是不错的

我们参考NY1096做茶叶中草甘膦，方法要求在零下40到零下60度衍生化，用GC-MS检测，很不好做。方法摘要如下：

提取：样品粉碎过20目。称取20目下样品16g于250ml的塑料烧杯中，加入纯水125ml，匀浆机高速浸提1min,浸泡一晚上。转移约50ml匀浆至50ml离心管，将3000r/min离心10min。吸取上清液20ml至另一50ml离心管，加入15ml二氯甲烷，振摇2-3min，离心10min。取上清液4.5ml于10ml具塞离心管中，加入0.5ml酸调节液，轻轻振摇，离心10min，上清液供净化用。

净化：移取1ml样品提取液过WCX柱(使用前10ml水预处理)，自然垂滴，待上清液完全流出后，用20mlCAX洗脱液淋洗，淋洗液收集于100ml鸡心瓶中，于60℃水浴中旋转蒸发至近干，60℃氮气吹干。用1mlCAX洗脱液充分溶解残渣，待衍生。经CAX柱净化后的收集液及1ml溶解定容液均可在<5℃保存7天。

衍生化：移取1.6ml衍生试剂至衍生玻璃瓶中，盖上盖，放置于低温冰箱中冷却至-40℃~-60℃。用移液枪移取50ul样品净化液，将移液头伸入衍生瓶液面以下缓慢释放样液，盖上盖，将衍生瓶再放入低温冰箱中冷却，3min后取出。放至室温后，将其置于85℃~90℃水浴反应1小时，每15min振摇1次。反应结束后取出衍生瓶，放至室温，在45℃水浴中氮气吹干，继续通氮气30min后盖上盖。用移液枪移取300ul柠檬醛乙酸乙酯溶液至衍生瓶中溶解残渣，供GC-MS测定用。

上机分析：
1、仪器： Agilent 6890GC-5973MS
2、色谱柱：DB-5MS 30m*0.25mm*0.25um

3、色谱分析条件：进样口温度：260℃；无分流进样；检测器温度：300℃；尾吹气流量：高纯氮，30ml/min；载气流速：高纯氮，1ml/min；炉温：60℃/1.5min→（15℃/min）→260℃/10min→（15℃/min）→300℃/20min。
AMPA的相对保留时间：7.42min；草甘膦的相对保留时间：8.70min。

4、定性和定量：取合适浓度的混合标准工作液50.0ul，按衍生步骤进行反应。取衍生后的标准液在m/z350~650范围内做全扫描得到TIC图。选则SIM模式采集数据，以相对保留时间、特征离子丰度比作为定性依据，采用外标法定量。

这个方法很不好做，因为有几点：一是衍生化不好把握；二是我们发现此方法很伤仪器，特别是离子源。做过后仪器响应马上下降许多，要清洗离子源。后来我们就不太开这个项目了。好像极性强的农药、除草剂都这样。

原文由 ctary(v2807696) 发表:

原文由 wjl0220(wjl0220) 发表:
大家好：

      有做草甘膦的吗？请交流一下测定方法，谢谢！

可以试试以下方法，方法中使用艾普锐的PMG草甘膦专用固相小柱，效果还是不错的

谢谢，我试试看。

原文由 DeeperBlue(yangdeyuan) 发表:
我们参考NY1096做茶叶中草甘膦，方法要求在零下40到零下60度衍生化，用GC-MS检测，很不好做。方法摘要如下：

提取：样品粉碎过20目。称取20目下样品16g于250ml的塑料烧杯中，加入纯水125ml，匀浆机高速浸提1min,浸泡一晚上。转移约50ml匀浆至50ml离心管，将3000r/min离心10min。吸取上清液20ml至另一50ml离心管，加入15ml二氯甲烷，振摇2-3min，离心10min。取上清液4.5ml于10ml具塞离心管中，加入0.5ml酸调节液，轻轻振摇，离心10min，上清液供净化用。

净化：移取1ml样品提取液过WCX柱(使用前10ml水预处理)，自然垂滴，待上清液完全流出后，用20mlCAX洗脱液淋洗，淋洗液收集于100ml鸡心瓶中，于60℃水浴中旋转蒸发至近干，60℃氮气吹干。用1mlCAX洗脱液充分溶解残渣，待衍生。经CAX柱净化后的收集液及1ml溶解定容液均可在<5℃保存7天。

衍生化：移取1.6ml衍生试剂至衍生玻璃瓶中，盖上盖，放置于低温冰箱中冷却至-40℃~-60℃。用移液枪移取50ul样品净化液，将移液头伸入衍生瓶液面以下缓慢释放样液，盖上盖，将衍生瓶再放入低温冰箱中冷却，3min后取出。放至室温后，将其置于85℃~90℃水浴反应1小时，每15min振摇1次。反应结束后取出衍生瓶，放至室温，在45℃水浴中氮气吹干，继续通氮气30min后盖上盖。用移液枪移取300ul柠檬醛乙酸乙酯溶液至衍生瓶中溶解残渣，供GC-MS测定用。

上机分析：
1、仪器： Agilent 6890GC-5973MS
2、色谱柱：DB-5MS 30m*0.25mm*0.25um

3、色谱分析条件：进样口温度：260℃；无分流进样；检测器温度：300℃；尾吹气流量：高纯氮，30ml/min；载气流速：高纯氮，1ml/min；炉温：60℃/1.5min→（15℃/min）→260℃/10min→（15℃/min）→300℃/20min。
AMPA的相对保留时间：7.42min；草甘膦的相对保留时间：8.70min。

4、定性和定量：取合适浓度的混合标准工作液50.0ul，按衍生步骤进行反应。取衍生后的标准液在m/z350~650范围内做全扫描得到TIC图。选则SIM模式采集数据，以相对保留时间、特征离子丰度比作为定性依据，采用外标法定量。

非常感谢。但是我们的实验条件不能满足这个方法，我们没有超低温冰箱。

我们为此专门买了超低温冰箱。但也是很难做。所以，除非一定要做，还是不要开展此项目为好。

原文由 DeeperBlue(yangdeyuan) 发表:
我们为此专门买了超低温冰箱。但也是很难做。所以，除非一定要做，还是不要开展此项目为好。

就是不知道效果所以不敢轻易申请购买。

回收率能做到多少？

原文由 zyl3367898(zyl3367898) 发表:

回收率能做到多少？

不稳定。可能是我们技术不到家。主要是衍生化不好把握，有时衍生化不完全，回收自然就上不去。