主题:【求助】为什么毛细管电泳电流持续稳定降低?

浏览0 回复22 电梯直达
lucklomo
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新人还不能发帖,借这个帖子问一个问题。
我最近在用毛细管电泳淌度法测药物与蛋白结合常数,但是重现性很差,而且甚至连线性关系都没有。我就想问一下,文献上说要在缓冲液中加入不同浓度的药物、然后以蛋白进样。可是Inlet的A1,A2和Outlet的A1放的都是缓冲液,应该怎么这三瓶缓冲液都加入药物还是只要其中一瓶加入药物就可以呢?
本科生对仪器不够了解,希望各位大神能够提供些帮助和解答。谢谢!
gabyg
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原文由 ericwong(ericwong) 发表:
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原文由 nini2006(nini2006) 发表:
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看起来像有气泡的样子,缓冲溶液有没超声呢?


超声了。

还有,进第一针时很正常,进第二针时电流就上不去了。
那可能是毛细管出口端有细微断裂。可以检查一下。另外用碱多冲一冲。不过,如果是曾经用过让后又长时间放置的毛细管其实已经不适合再用了,换根新的吧。


已经换了新毛细管,问题还没有解决,电流还是这样,愁死我了。


新毛细管做了什么样的处理?


新毛细管甲醇——1mol/L氢氧化钠——水——缓冲液
gabyg
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原文由 beyond1977(xsh6743) 发表:

最好再提供多点数据,比如第一针正常的图谱,还有你做样的程序,你说第一真好,第二针就不行了,会不会是你的冲洗程序有问题?


冲洗程序就是:水——缓冲液

我用0.1mol/L氢氧化钠做缓冲液,不进样,直接加电,发现电流一开始很平稳,然后也开始慢慢下降了。
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2014/5/27 0:33:04 Last edit by v2716616
ericwong
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看起来像有气泡的样子,缓冲溶液有没超声呢?


超声了。

还有,进第一针时很正常,进第二针时电流就上不去了。
那可能是毛细管出口端有细微断裂。可以检查一下。另外用碱多冲一冲。不过,如果是曾经用过让后又长时间放置的毛细管其实已经不适合再用了,换根新的吧。


已经换了新毛细管,问题还没有解决,电流还是这样,愁死我了。


新毛细管做了什么样的处理?


新毛细管甲醇——1mol/L氢氧化钠——水——缓冲液

"新毛细管甲醇"?
chenhua_zhang
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      做Beckman毛细管电泳仪器校验,按照《JJG 964-2001 毛细管电泳仪检定规程》检定:

    波长254nm 75μm × 40c m毛细管,柱温25℃,电泳电压为15 kV。选择气压8 kPa,进样时间3s(气压进样)。用20 mmol/L的磷酸氢二钠作为缓冲液,取质量浓度为2 X 10-6 g/ml的维生素B6溶液进样。

   



      校验用的毛细管有一年没用了,用之前活化了一下。电流图如上,电流持续降低,波动,然后又会陡然升至正常电流40μA。还有,进第一针时很正常,进第二针时电流就上不去了。

      后来买了新毛细管,结果还是这样。

      对毛细管还不太了解,请教大家这是怎么回事?


楼主你好,我们实验室的beckman MDQ P/ACE 的仪器有同样的问题,困扰有半个月了。不知道楼主的问题解决没有?

目前我们发现,换毛细管,加电压不进样,都不能解决这个电流问题。

总的来说,一天中前几针的电流时稳定的,连续使用就会出现上述问题。仪器之前放置了有6年没有使用,所以。。。

谢谢
chenhua_zhang
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      做Beckman毛细管电泳仪器校验,按照《JJG 964-2001 毛细管电泳仪检定规程》检定:

    波长254nm 75μm × 40c m毛细管,柱温25℃,电泳电压为15 kV。选择气压8 kPa,进样时间3s(气压进样)。用20 mmol/L的磷酸氢二钠作为缓冲液,取质量浓度为2 X 10-6 g/ml的维生素B6溶液进样。

   



      校验用的毛细管有一年没用了,用之前活化了一下。电流图如上,电流持续降低,波动,然后又会陡然升至正常电流40μA。还有,进第一针时很正常,进第二针时电流就上不去了。

      后来买了新毛细管,结果还是这样。

      对毛细管还不太了解,请教大家这是怎么回事?
nini2006
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原文由 chenhua_zhang(v2636203) 发表:
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      做Beckman毛细管电泳仪器校验,按照《JJG 964-2001 毛细管电泳仪检定规程》检定:

    波长254nm 75μm × 40c m毛细管,柱温25℃,电泳电压为15 kV。选择气压8 kPa,进样时间3s(气压进样)。用20 mmol/L的磷酸氢二钠作为缓冲液,取质量浓度为2 X 10-6 g/ml的维生素B6溶液进样。

   



      校验用的毛细管有一年没用了,用之前活化了一下。电流图如上,电流持续降低,波动,然后又会陡然升至正常电流40μA。还有,进第一针时很正常,进第二针时电流就上不去了。

      后来买了新毛细管,结果还是这样。

      对毛细管还不太了解,请教大家这是怎么回事?


楼主你好,我们实验室的beckman MDQ P/ACE 的仪器有同样的问题,困扰有半个月了。不知道楼主的问题解决没有?

目前我们发现,换毛细管,加电压不进样,都不能解决这个电流问题。

总的来说,一天中前几针的电流时稳定的,连续使用就会出现上述问题。仪器之前放置了有6年没有使用,所以。。。

谢谢
每次进样前按一下程序冲一冲柱子试试:氢氧化钠-水-buffer (2-3min)
chenhua_zhang
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      做Beckman毛细管电泳仪器校验,按照《JJG 964-2001 毛细管电泳仪检定规程》检定:

    波长254nm 75μm × 40c m毛细管,柱温25℃,电泳电压为15 kV。选择气压8 kPa,进样时间3s(气压进样)。用20 mmol/L的磷酸氢二钠作为缓冲液,取质量浓度为2 X 10-6 g/ml的维生素B6溶液进样。

   



      校验用的毛细管有一年没用了,用之前活化了一下。电流图如上,电流持续降低,波动,然后又会陡然升至正常电流40μA。还有,进第一针时很正常,进第二针时电流就上不去了。

      后来买了新毛细管,结果还是这样。

      对毛细管还不太了解,请教大家这是怎么回事?


楼主你好,我们实验室的beckman MDQ P/ACE 的仪器有同样的问题,困扰有半个月了。不知道楼主的问题解决没有?

目前我们发现,换毛细管,加电压不进样,都不能解决这个电流问题。

总的来说,一天中前几针的电流时稳定的,连续使用就会出现上述问题。仪器之前放置了有6年没有使用,所以。。。

谢谢
每次进样前按一下程序冲一冲柱子试试:氢氧化钠-水-buffer (2-3min)


加电压前都是5min 0.1M NaOH 5min H2O 5min 20mM pH7.0 phosphate buffer
nini2006
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      做Beckman毛细管电泳仪器校验,按照《JJG 964-2001 毛细管电泳仪检定规程》检定:

    波长254nm 75μm × 40c m毛细管,柱温25℃,电泳电压为15 kV。选择气压8 kPa,进样时间3s(气压进样)。用20 mmol/L的磷酸氢二钠作为缓冲液,取质量浓度为2 X 10-6 g/ml的维生素B6溶液进样。

   



      校验用的毛细管有一年没用了,用之前活化了一下。电流图如上,电流持续降低,波动,然后又会陡然升至正常电流40μA。还有,进第一针时很正常,进第二针时电流就上不去了。

      后来买了新毛细管,结果还是这样。

      对毛细管还不太了解,请教大家这是怎么回事?


楼主你好,我们实验室的beckman MDQ P/ACE 的仪器有同样的问题,困扰有半个月了。不知道楼主的问题解决没有?

目前我们发现,换毛细管,加电压不进样,都不能解决这个电流问题。

总的来说,一天中前几针的电流时稳定的,连续使用就会出现上述问题。仪器之前放置了有6年没有使用,所以。。。

谢谢
每次进样前按一下程序冲一冲柱子试试:氢氧化钠-水-buffer (2-3min)


加电压前都是5min 0.1M NaOH 5min H2O 5min 20mM pH7.0 phosphate buffer
很久不用的仪器是会有很多问题的,电极清洗过了吗?用棉花蘸酒精把电极擦一擦。
chenhua_zhang
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      做Beckman毛细管电泳仪器校验,按照《JJG 964-2001 毛细管电泳仪检定规程》检定:

    波长254nm 75μm × 40c m毛细管,柱温25℃,电泳电压为15 kV。选择气压8 kPa,进样时间3s(气压进样)。用20 mmol/L的磷酸氢二钠作为缓冲液,取质量浓度为2 X 10-6 g/ml的维生素B6溶液进样。

   



      校验用的毛细管有一年没用了,用之前活化了一下。电流图如上,电流持续降低,波动,然后又会陡然升至正常电流40μA。还有,进第一针时很正常,进第二针时电流就上不去了。

      后来买了新毛细管,结果还是这样。

      对毛细管还不太了解,请教大家这是怎么回事?


楼主你好,我们实验室的beckman MDQ P/ACE 的仪器有同样的问题,困扰有半个月了。不知道楼主的问题解决没有?

目前我们发现,换毛细管,加电压不进样,都不能解决这个电流问题。

总的来说,一天中前几针的电流时稳定的,连续使用就会出现上述问题。仪器之前放置了有6年没有使用,所以。。。

谢谢
每次进样前按一下程序冲一冲柱子试试:氢氧化钠-水-buffer (2-3min)


加电压前都是5min 0.1M NaOH 5min H2O 5min 20mM pH7.0 phosphate buffer
很久不用的仪器是会有很多问题的,电极清洗过了吗?用棉花蘸酒精把电极擦一擦。


电极清洗过,而且新的电极都换过。比较奇怪的是,仪器停一天,电流能正常。连着用就不行了,现在想把它卸了,里面看看。
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