主题：【已应助】HPLC分析叶酸精密度和线性都比较差。

原文由 浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:
试问，加离子对试剂是为了什么，怎样才能实现离子对试剂的作用？以下说说我的理解，因为我用离子对做酸性物质少，不一定对，但楼主不妨参考一下。
对于碱性物质来说，因为保留很弱，即使提高了流动相的pH，也不一定能有多大的保留。这种情况下，就可能需要使用离子对试剂；并且，为了使离子对试剂发挥作用，一般将流动相pH调至酸性，为的就是使碱性物质全部电离，以便于离子对试剂中的带电基团结合，减小极性以增强保留。
对于酸性物质来说，需要使用离子对试剂的情况下，基本上化合物的pKa很小。在这种情况下，流动相pH可能需要近中性才好。所以，不知道楼主流动相的pH是多少，可否试试其他pH。

还有，楼主的流动相如果只添加了离子对试剂的话，是不合适的，最好还能加上其他缓冲盐，否则光离子对是没有缓冲能力的，很容易因为样品带有酸碱性影响流动相pH而使方法不耐用。

原文由 lifesinger(lifesinger) 发表:

原文由 浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:
试问，加离子对试剂是为了什么，怎样才能实现离子对试剂的作用？以下说说我的理解，因为我用离子对做酸性物质少，不一定对，但楼主不妨参考一下。
对于碱性物质来说，因为保留很弱，即使提高了流动相的pH，也不一定能有多大的保留。这种情况下，就可能需要使用离子对试剂；并且，为了使离子对试剂发挥作用，一般将流动相pH调至酸性，为的就是使碱性物质全部电离，以便于离子对试剂中的带电基团结合，减小极性以增强保留。
对于酸性物质来说，需要使用离子对试剂的情况下，基本上化合物的pKa很小。在这种情况下，流动相pH可能需要近中性才好。所以，不知道楼主流动相的pH是多少，可否试试其他pH。

还有，楼主的流动相如果只添加了离子对试剂的话，是不合适的，最好还能加上其他缓冲盐，否则光离子对是没有缓冲能力的，很容易因为样品带有酸碱性影响流动相pH而使方法不耐用。

先检讨一下自己，虽然做液相好久，但对基础理论并没有仔细学习过。

我目前用的叶酸流动相体系，和我们检测盐酸吡哆醇、核黄素、烟酸和盐酸硫胺素的流动相是一

样的。PH是1.8，不含缓冲盐。

据我的大概了解，这个PH值应该是为了增加保留。另外因为产品中有含铁、锌离子，据说PH太高

会析出对柱子不利。

原文由 浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:

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试问，加离子对试剂是为了什么，怎样才能实现离子对试剂的作用？以下说说我的理解，因为我用离子对做酸性物质少，不一定对，但楼主不妨参考一下。
对于碱性物质来说，因为保留很弱，即使提高了流动相的pH，也不一定能有多大的保留。这种情况下，就可能需要使用离子对试剂；并且，为了使离子对试剂发挥作用，一般将流动相pH调至酸性，为的就是使碱性物质全部电离，以便于离子对试剂中的带电基团结合，减小极性以增强保留。
对于酸性物质来说，需要使用离子对试剂的情况下，基本上化合物的pKa很小。在这种情况下，流动相pH可能需要近中性才好。所以，不知道楼主流动相的pH是多少，可否试试其他pH。

还有，楼主的流动相如果只添加了离子对试剂的话，是不合适的，最好还能加上其他缓冲盐，否则光离子对是没有缓冲能力的，很容易因为样品带有酸碱性影响流动相pH而使方法不耐用。

先检讨一下自己，虽然做液相好久，但对基础理论并没有仔细学习过。

我目前用的叶酸流动相体系，和我们检测盐酸吡哆醇、核黄素、烟酸和盐酸硫胺素的流动相是一

样的。PH是1.8，不含缓冲盐。

据我的大概了解，这个PH值应该是为了增加保留。另外因为产品中有含铁、锌离子，据说PH太高

会析出对柱子不利。

叶酸这么老的品种，难道没有药典方法吗？

原文由 浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:
铁锌离子在高pH下析出，应该是形成了氢氧化铁、氢氧化锌吧。氢氧化铁麻烦点，氢氧化锌不用担心。但是就算加了缓冲盐，流动相的pH调到酸性，应该也不太会形成氢氧化铁，何况离子对试剂中难道没有碱离子吗？

至于pH，既然使用了离子对，为何不可以试试其他的，比如3.0，pH1.8没有缓冲盐在这个位置有缓冲能力的吧？

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铁锌离子在高pH下析出，应该是形成了氢氧化铁、氢氧化锌吧。氢氧化铁麻烦点，氢氧化锌不用担心。但是就算加了缓冲盐，流动相的pH调到酸性，应该也不太会形成氢氧化铁，何况离子对试剂中难道没有碱离子吗？

至于pH，既然使用了离子对，为何不可以试试其他的，比如3.0，pH1.8没有缓冲盐在这个位置有缓冲能力的吧？

我们的流动相是酸性的，可能是为了防止金属离子析出，这也是不用药典流动相的原因。

但样品不能用酸性溶液提，酸性下叶酸溶解度不好，所以样品供试液是用碱性溶液提取的。

我也不知道为啥要调PH为1.8，准备照你说的加点缓冲盐，但愿有改善。

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试问，加离子对试剂是为了什么，怎样才能实现离子对试剂的作用？以下说说我的理解，因为我用离子对做酸性物质少，不一定对，但楼主不妨参考一下。
对于碱性物质来说，因为保留很弱，即使提高了流动相的pH，也不一定能有多大的保留。这种情况下，就可能需要使用离子对试剂；并且，为了使离子对试剂发挥作用，一般将流动相pH调至酸性，为的就是使碱性物质全部电离，以便于离子对试剂中的带电基团结合，减小极性以增强保留。
对于酸性物质来说，需要使用离子对试剂的情况下，基本上化合物的pKa很小。在这种情况下，流动相pH可能需要近中性才好。所以，不知道楼主流动相的pH是多少，可否试试其他pH。

还有，楼主的流动相如果只添加了离子对试剂的话，是不合适的，最好还能加上其他缓冲盐，否则光离子对是没有缓冲能力的，很容易因为样品带有酸碱性影响流动相pH而使方法不耐用。

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试问，加离子对试剂是为了什么，怎样才能实现离子对试剂的作用？以下说说我的理解，因为我用离子对做酸性物质少，不一定对，但楼主不妨参考一下。
对于碱性物质来说，因为保留很弱，即使提高了流动相的pH，也不一定能有多大的保留。这种情况下，就可能需要使用离子对试剂；并且，为了使离子对试剂发挥作用，一般将流动相pH调至酸性，为的就是使碱性物质全部电离，以便于离子对试剂中的带电基团结合，减小极性以增强保留。
对于酸性物质来说，需要使用离子对试剂的情况下，基本上化合物的pKa很小。在这种情况下，流动相pH可能需要近中性才好。所以，不知道楼主流动相的pH是多少，可否试试其他pH。

还有，楼主的流动相如果只添加了离子对试剂的话，是不合适的，最好还能加上其他缓冲盐，否则光离子对是没有缓冲能力的，很容易因为样品带有酸碱性影响流动相pH而使方法不耐用。

先检讨一下自己，虽然做液相好久，但对基础理论并没有仔细学习过。

我目前用的叶酸流动相体系，和我们检测盐酸吡哆醇、核黄素、烟酸和盐酸硫胺素的流动相是一

样的。PH是1.8，不含缓冲盐。

据我的大概了解，这个PH值应该是为了增加保留。另外因为产品中有含铁、锌离子，据说PH太高

会析出对柱子不利。