主题：【分享】《CNW液相色谱柱使用征文大赛之七》：CNW Athena C18-WP色谱柱分离D、L-抗坏血酸

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发表于：2014/05/30 15:17:05 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

CNW Athena C18-WP色谱柱分离D、L-抗坏血酸

一、原理

试样中的抗坏血酸用偏磷酸溶液提取， L-VC 和 D-VC 用带有紫外检测器的液相色谱仪（波长 245 nm）测定，以色谱峰的保留时间定性，外标法峰面积定量。

二、试剂、标准品
1、偏磷酸溶液（20g/L）：称取 20g（精确至 0.1g）偏磷酸，溶于水并稀释至 1L。
2、L-VC 标准品：用 20g/L 偏磷酸溶液配制成 1、5、10、20、50mg/L 五个梯度点。

3、D-VC 标准品：用 20g/L 偏磷酸溶液配制成 1、5、10、20、50mg/L 五个梯度点。

三、色谱条件
1、仪器：岛津 LC-20AD。
2、色谱柱：CNW Athena C18-WP,100A,4.6mm*250mm,5μm。
3、检测器：二级管阵列检测器。
4、流动相：A：6.8 g 磷酸二氢钾和 0.91 g 十六烷基三甲基溴化铵，溶解在 1 L 水（用磷酸调 PH2.5-2.8）； B： 100%甲醇。按 A:B=98:2 混合，过 0.45μm 滤膜，超声脱气。
5、流速：0.7mL/min。
6、检测波长：245nm。
7、柱温：25℃。

8、进样量：5μL。

四、分析步骤

鲜橙多：吸取 10mL 液体试样于 50 mL 离心管中，用 20 g/L 的偏磷酸溶液溶解样品并定容，振荡，超声提取 5min 后, 于 4000r/min 离心 5min，取上清液过 0.45μm 滤膜后待测。

五、标准曲线的绘制

1、L-抗坏血酸

2、D-抗坏血酸

线性范围：L-VC 和 D-VC 在 1 mg/L～50 mg/L 范围内均有良好的线性关系

六、回收率

七、精密度、准确度
鲜橙多六平行结果如下：

八、方法检出限
50mg/L 标品响应峰高 44.22mv，噪音 0.024mv
检出限=10×0.024mv×50mg/L/39.22mv=0.31mg/L
方法检出限=0.31mg/L×5（稀释倍数）=1.55mg/L

九、结论
相关系数 R，L-VC 和 D-VC 都是 0.9999；回收率在 96.1%-101.3%；变异系数 L-VC为 1.98%，D-VC 为 2.64%；相对偏差 L-VC 为 5.26%，D-VC 为 7.30%。以上数据符合GB/T27404-2008 《实验室质量控制规范、食品理化检测》中规定相关系数在 0.99 以上；回收率在 95%-105%内；变异系数小于 3.8%；相对偏差小于 15%。现有的国家标准中还没有高效液相色谱法测定食品中抗坏血酸的方法，D 和 L 两种抗坏血酸 HPLC 法分离技术资料也很少。根据一份国家标准送检稿，采用不同的 C18
色谱柱对 L-VC 和 D-VC 同时检测，发现 CNW Athena C18-WP 色谱柱分离效果最好。从流动相可以看出，加入了离子对试剂，水相大，pH 比较低。而 CNW Athena C18-WP 的特点，键合极性 C18 基团，pH 稳定范围 1.5-10，适合于 100%水流动相，极性物质保留强等特点正好符合抗坏血酸的检测条件。 L-VC 和 D-VC 在其它 C18 色谱柱分离度差，而在CNW Athena C18-WP 可以完全分离 L-VC 和 D-VC，如下图：