主题:【讨论】方法开发过程中一般要遵循哪些原则或技巧

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huaibeijiayuan
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方法开发是一门很深的学问,作为非专业技术人员,想开发新的色谱条件,应该遵循哪些原则呢,或者说有哪些技巧?
该帖子作者被版主 月旭科技--小S4积分, 2经验,加分理由:欢迎来极限色谱柱版讨论
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请北北看药典附录后面有的药品分析方法验证。


如果药典中没有的呢?
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请北北看药典附录后面有的药品分析方法验证。


如果药典中没有的呢?

北北,我说的不是具体品种怎么做,而是说有个指导原则
中国药典附录XIX药品质量标准分析方法验证指导原则
里面做了一些要做哪些项目的规定,但没有技巧哦。
sunpengwjh
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小卢
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zxhcnf
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1)先看分子量和分子结构;
2)根据分子量大小选色谱柱(分子量超过1W的分子选300A的柱子,小于1W选120A的就用了;
3)先在C18柱子上花至少30min0~100%甲醇的梯度,看看化合物在C18上面的保留能力;
4)再根据出峰的时间,进一步调整,总的规则是,先把目标化合物的峰让它跑出来,并要求获得重现性,调整好出峰时间;然后再调整好峰形,使其峰形对称性良好。

注意:通常在方法开发的时候,如非迫不得已,最好是用流动相来溶解样品,做梯度的朋友则用初始流动相来溶解样品。这样会减少很多鬼峰出现的几率,同时会改善主峰的峰形,比如“前拖”是不用流动相溶解最容易出现的状况。
该帖子作者被版主 samanthalas4积分, 2经验,加分理由:很有分量的回答!
huaibeijiayuan
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1)先看分子量和分子结构;
2)根据分子量大小选色谱柱(分子量超过1W的分子选300A的柱子,小于1W选120A的就用了;
3)先在C18柱子上花至少30min0~100%甲醇的梯度,看看化合物在C18上面的保留能力;
4)再根据出峰的时间,进一步调整,总的规则是,先把目标化合物的峰让它跑出来,并要求获得重现性,调整好出峰时间;然后再调整好峰形,使其峰形对称性良好。



谢谢,什么情况下需考虑加缓冲溶液呢
小卢
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1)先看分子量和分子结构;
2)根据分子量大小选色谱柱(分子量超过1W的分子选300A的柱子,小于1W选120A的就用了;
3)先在C18柱子上花至少30min0~100%甲醇的梯度,看看化合物在C18上面的保留能力;
4)再根据出峰的时间,进一步调整,总的规则是,先把目标化合物的峰让它跑出来,并要求获得重现性,调整好出峰时间;然后再调整好峰形,使其峰形对称性良好。


感觉很专业,阁下搞研发的?
zxhcnf
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1)先看分子量和分子结构;
2)根据分子量大小选色谱柱(分子量超过1W的分子选300A的柱子,小于1W选120A的就用了;
3)先在C18柱子上花至少30min0~100%甲醇的梯度,看看化合物在C18上面的保留能力;
4)再根据出峰的时间,进一步调整,总的规则是,先把目标化合物的峰让它跑出来,并要求获得重现性,调整好出峰时间;然后再调整好峰形,使其峰形对称性良好。



谢谢,什么情况下需考虑加缓冲溶液呢


有两种情况下需要考虑加缓冲盐溶液:
1)在极端条件下如纯水条件下,峰还是出来太快,这个时候就需要加入缓冲盐,然后再调节pH来考查pH对样品保留时间的影响;
2)峰出来了,但是峰形比较差,前拖或后拖,这个时候也需要考虑加入缓冲盐溶液,通常加入浓度为50mmol/L时认为缓冲盐的量应该是足够大了,但仍需视情况来定;加入缓冲盐后如果峰形还是不太好,还需要进一步的考查pH的影响。
这两个方面如果能结合分子结构进行调整,并加以经验总结,将会事半功倍。


zxhcnf
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1)先看分子量和分子结构;
2)根据分子量大小选色谱柱(分子量超过1W的分子选300A的柱子,小于1W选120A的就用了;
3)先在C18柱子上花至少30min0~100%甲醇的梯度,看看化合物在C18上面的保留能力;
4)再根据出峰的时间,进一步调整,总的规则是,先把目标化合物的峰让它跑出来,并要求获得重现性,调整好出峰时间;然后再调整好峰形,使其峰形对称性良好。


感觉很专业,阁下搞研发的?


是的,我是月旭公司的应用工程师
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