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主题：【讨论】液相梯度洗脱？

浏览0 回复6 电梯直达
阎君
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发表于：2014/06/21 11:28:58 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我上次做了一个样品，这个样品呢没用梯度洗脱，但是用到缓冲盐了，我每次做同一类样品昨晚两个之后，第3个样品呢就会有杂峰，然后冲洗一下程序之后呢进样又好了，两针之后依旧是有杂峰，请问啥原因啊，我都是做的同一个样品，而且做完之后基本上平衡了，还有一个问题那就是我用梯度洗脱的时候，基线很不稳，是啥原因啊，会是残留么或者说是缓冲盐析出来了呢，不用缓冲盐的话，样品会水解峰会分裂，所以我才采用一个比例洗脱，没用到梯度洗脱，求各位老师解惑
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2014/6/21 12:45:05 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
杂峰可能是前面两针中强保留物质在第三针中出峰，梯度洗脱一般都会有点基线漂移，如果漂得很厉害，可能是梯度过快，流动相比例转变太快
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houjjun
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2014/6/21 23:11:49 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品中的杂质是避免不了的，一般以上前处理，二是冲洗色谱柱。一般用有机相含量大一些的流动相冲洗
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houjjun
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2014/6/21 23:13:44 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
梯度洗脱有时是必须的，梯度洗脱的稳定性肯定没有等度好，这是一定的。另外梯度洗脱是流速变化不要太快，否则基线会不稳定
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e_liang369
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2014/6/23 8:38:42 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你流动相里有杂质呗，建议用梯度
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zhaohua8011
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2014/6/23 10:55:37 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有可能杂质没有冲出来就会这样！用梯度洗脱的时候基线很不稳，是不是混合部分问题！
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阎君
yiqishiyong
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2014/6/24 10:28:05 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
同一个样品在连续的第三次进样呢 会有许多杂峰  然后冲洗完之后呢再进一次就好了，难道真的是残留没有冲洗出来么，这个就麻烦大了啊，用梯度洗脱不是没有试过啊，我也试过用15min从60的甲醇调成90的甲醇啊，这个太快么，还有我这个为啥会有负峰呢，是不是我进样时样品和流动相混合的时候配比不一样导致的啊
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