硫酸粘杆菌素由多粘杆菌产生，对革兰氏阴性菌有很强的抗菌作用，治疗革兰氏阴性菌（大肠埃希菌等）引起的肠道疾病效果明显，常用作饲料添加剂。对绿脓杆菌感染（败血症、尿路感染、烧伤或外伤创面感染）也有很好的效果。用于饲料添加剂还有明显促生长作用，和磺胺嘧啶合用效果更好。

本品也有很多副作用，内服很少吸收，本品吸收后，对肾脏和神经系统均有明显毒性。使用时剂量过大或疗程过长，以及注射给药和肾功能不全时均有中毒危险。

所以这种东西对于某些症状疗效较好，但也得谨慎使用。检测某些产品中硫酸粘杆菌素的含量就显得尤为重要。下面我们就重点看看高效液相色谱法检测某饲料中硫酸粘杆菌素吧。

实验部分

原理

取适量该粉末样品加10%甲醇溶解超声提取，经进样器进入高效液相色谱系统，C18色谱柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，峰面积定量计算（外标法）。

仪器及试剂

1．仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）、分析天平、超声振荡器、溶剂过滤器

2．试剂：甲醇、乙腈（均为色谱纯），纯净水，硼砂溶液

样品处理

提取方法：取饲料样品适量，充分粉碎后过0.45mm孔径筛后，装入磨口瓶中备用。准确称取上一步处理过的饲料样品5g，加入150ml 10%的甲醇水溶液，超声波提取20min。将提取液全部转移到1000ml鸡心瓶中，70℃旋转蒸发器蒸至近干，用去离子水溶解并定容至1ml，0.45um有机微孔滤膜滤过，待测。

色谱条件

检测器：紫外检测器

色谱柱：C18,4.6 X 250mm，5um

检测波长：215nm

流动相：乙腈：PH6.0的硼砂缓冲液=70:30（V：V）

流速：1.0mL/min

进样量：10ul

柱温：室温

目标物：硫酸粘杆菌素B，硫酸粘杆菌素A

标准品色谱图：

标准品，三次平行进样交错叠加色谱图：

样品色谱图：

样品，三次平行进样交错叠加色谱图：

以下是定性、定量数据：

	序号	保留时间(min)	峰面积 (μAu*s)
标样-1	1	13.533	1262989
标样-1	2	28.767	1306312
标样-2	1	13.533	1275709
标样-2	2	28.767	1309446
标样-3	1	13.533	1262400
标样-3	2	28.783	1302764
样品-1	1	13.55	2311378
样品-1	2	28.767	1164616
样品-2	1	13.567	2319845
样品-2	2	28.817	1165157
样品-3	1	13.583	2329037
样品-3	2	28.833	1176529

从以上色谱图可以看出，硫酸粘杆菌素B，硫酸粘杆菌素A分离度很好，定性、定量重复性很一致，准确度很高。该方法非常实用于饲料样品中硫酸粘杆菌素检测。

采用该方法或相关方法检测该样品时需要注意的几点：

1.样品前处理时超声波提取一般20min就可以，但有时由于温度低、超声波功率小等原因，20min不够。那就得适当延长提取时间，或适当控制超声波温度（超声波有控温功能的可控温50℃，没有控温功能的，可在超声波中加入50℃左右的温水）以保证样品中硫酸粘杆菌素B，硫酸粘杆菌素A完全溶解。

2.很多方法中提到液相泵流速0.7ml/min，其实这样的效果也很好。0.7ml/min的流速，流动相一般为乙腈：PH6.0的硼砂缓冲液=75:25（V：V）。但一般的等度液相和色谱柱1.0ml/min流速效果更好，那样流动相最好选择乙腈：PH6.0的硼砂缓冲液=70:30（V：V）。

3.检测这个样品时，色谱柱温度大家大多都选室温，其实为了保证定性、定量分析的准确度，最好还是要对色谱柱控温。如果为了减短分析时间，还可以适当增加色谱柱温度。

4.检测这个样品时，一般的方法进样量是20ul，这样对于硫酸粘杆菌素A色谱峰偏宽，偏低。如果把进样量改为10ul，色谱峰峰宽会明显变窄，峰形明显变好。如果嫌色谱峰低，可以适当增加样品浓度。

以上是本人做该样品分析的一些经验和体会，希望能给大家带来帮助。也非常希望大家能多提宝贵意见和建议，以相互学习，共同进步。谢谢大家！