高效液相色谱检测幼儿配方奶粉中维生素添加剂
实验部分
原理
取适量该品加水超声波震荡提取,经进样器进入高效液相色谱系统,色谱柱分离,紫外检测器检测,保留时间定性,峰面积定量计算。
标准品溶液配制
精密称取烟酸及烟酰胺标准品适量,分别配制1.0 mg/mL标准品储备液和40 μg/mL标准品中间液。
烟酸及烟酰胺混合标准系列测定液
分别准确吸取烟酸及烟酰胺混合标准中间液0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL于50 mL 容量瓶中,用水定容。该标准系列浓度分别为0.00 μg/mL、0.80 μg/mL、1.60 μg/mL、4.00 μg/mL、8.00 μg/mL。有了保证标准品溶液变质,尽量临用前配。
样品溶液配置
不含淀粉的试样:称取混合均匀固体试样约3.0g(精确到0.0001 g)加入约25 mL的水,于150 mL 锥形瓶中,振摇,需充分溶解,并冷却至室温。
提取:将上述锥形瓶置于超声波振荡器中振荡约10 min。
沉淀及定容:待试样溶液降至室温后,用盐酸(2.4mol/L)调节试样溶液的pH值至1.7±0.1,放置约2 min 后,再用氢氧化钠溶液(2.5mol/L)调节试样溶液的pH值至4.5±0.1。混匀后经滤纸过滤,用水反复冲洗锥形瓶,滤液合并于50mL容量瓶中,用水定容至刻度,滤液再经0.45 μm 微孔滤膜加压过滤,即为试样待测液。
分析条件
检测器:紫外检测器
色谱柱:C18色谱柱(粒径5μm,150mm ×4.6mm)
检测波长:261nm
进样量:10μL
柱温:室温
流速:1.0 mL/min
流动相:
准确量取甲醇70mL,异丙醇20mL,准确称取庚烷磺酸钠1g,用910mL水溶解并混匀后,用高氯酸调pH至2.1±0.1,经0.45μm有机相膜过滤。
标准品色谱图:
0.00 μg/mL标准品溶液色谱图:
0.80 μg/mL标准品溶液色谱图:
1.60 μg/mL标准品溶液色谱图:
4.00 μg/mL标准品溶液色谱图:
8.00 μg/mL标准品溶液色谱图:
色谱图重叠效果图:
样品1标准曲线及线性系数:
样品2标准曲线及线性系数:
样品1色谱图:
样品2色谱图:
计算
计算公式:
X1 或2——试样中烟酸或烟酰胺的含量,单位为微克每百克(μg/100 g);
m——试样的质量,单位为克(g);
ci——试样待测液中烟酸或烟酰胺的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
V——试样溶液的体积,单位为毫升(mL)。
试样中维生素烟酸总含量的计算
试样中维生素烟酸的总含量按(2)式计算:
式中:
X——试样中维生素烟酸的总含量,单位为微克每百克(μg/100 g);
X1——试样中烟酸的含量,单位为微克每百克(μg/100 g);
X2——试样中烟酰胺的含量,单位为微克每百克(μg/100 g)。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留两位有效数字。
计算结果
样品1烟酸、烟酰胺含量分别为:0.04μg/100 g、0.31μg/100 g
样品2烟酸、烟酰胺含量分别为:0.04μg/100 g、0.29μg/100 g
结论
该方法检测幼儿配方奶粉中烟酸、烟酰胺含量,具有结果快速、准确、可靠、检出限低等多种优势,可作为幼儿配方奶粉中烟酸、烟酰胺含量检测的首选方法,也可作为类似检测的参考方法,参考价值极高。