摘　要　目的：建立西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸的定性定量检验方法。方法：采用薄层色谱法和高效液相色谱法建立西黄丸中乳香类成分11-羰基-β-乙酰乳香酸的方法。结果：运用建立的薄层色谱法检测12个生产厂家提供的17批西黄丸，均含有11-羰基-β-乙酰乳香酸，但含量差别大，运用高效液相色谱法对其进行含量测定，其中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量最低为0.27％，最高为1.05％。结论：建立薄层色谱法和高效液相色谱法可用于西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸的定性定量检验，可作为西黄丸现行法定检验标准中乳香显微鉴别的有益补充。

西黄丸为一种纯中药制剂，属于临床急重症用药品种，由牛黄、麝香、乳香、没药四种中药材组成，具有抗菌消炎、抗病毒、抗结核、镇静止痛、止血消肿、抗癌以及增强机体抗病能力的作用，是经典抗癌药物。在临床中用于各种癌症的治疗及辅助治疗，能改善中晚期癌症患者的临床症状，提高患者生活质量。其中，乳香主要成分中以11-羰基-β-乙酰乳香酸含量最高。本文采用薄层色谱法和高效液相色谱法对西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸进行鉴别和含量测定，现报道如下。

1仪器与试药

CAMATS-4全自动点样仪；CAMAGREPRO-TAR3薄层扫描仪带照相系统；戴安Ulitimate 3000高效液相色谱仪（PDA检测器）；XS-204电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。11-羰基-β-乙酰乳香酸（中国食品药品检定研究院，批号为(111760-200601）；牛黄、麝香、没药、黄米药材（由A厂提供）；西黄丸样品为抽检样品，由12个企业提供，共17批；乙腈为色谱纯；磷酸、甲醇均为分析纯；实验用水由Milli-Q系统制备。

2 方法和结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 供试溶液的制备：取本品1g，研细，加甲醇10ml，超声处理10min，滤过，滤液作为供试品溶

液。

2.1.2 对照溶液的制备：取11-羰基-β-乙酰乳香酸6mg，置25ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释到刻
度，作为对照品溶液。

2.1.3 阴性对照：按照工艺制备阴性样品，取牛黄15.49mg，麝香14.70mg，没药552.44mg，黄米351.68mg，混合均匀，制成缺乳香的细粉，加甲醇10ml，超声处理10min，滤过，滤液作为阴性样品溶液。

2.1.4 薄层色谱方法：取上述供试品溶液2μl，对照品溶液5μl，阴性样品溶液2μl，分别点于同一GF254板上，以石油醚（60～90℃）-环己烷－乙酸乙酯－甲酸（2∶6∶3∶0.5）为展开剂，展开、取
出、晾干，置254nm下检视。

2.1.5 薄层色谱法实验结果：结果见图1。供试品溶液在与对照品色谱相应的位置上显相同的荧光淬灭斑点，阴性样品无干扰，表明该方法能够有效鉴别西黄丸中的11-羰基-β-乙酰乳香酸。另外，从结果可以看出，12个生产厂家的17批西黄丸均检出11-羰基-β-乙酰乳香酸，但是各厂家11-羰基-β-乙酰乳香酸的斑点颜色深浅不同，表明各厂家西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸的含量有所不同。

2.1.6 薄层色谱法检出限：将上述11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品溶0.222mg·ml-1，按0.2 ，0.4，0.6，1，2μl的点样量，条带宽度6mm，点样。结果表明0.4μl的点样量接近检出限，可认定检出限为88.8ng。为了进一步确证薄层色谱的检验结果并分析乳香含量，将12个生产厂家17批供试品进行了乳香主成分11-羰基-β-乙酰乳香酸高效液相色谱含量测定。

2.2高效液相色谱法含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱：Aglient Zobax SB-C18（4.6×250mm，5μm），柱温：30℃，流动相：乙腈-0.4％磷酸（90∶10），流速：1ml·min-1，检测波长：249nm，进样量：10μl。

2.2.2对照品溶液的制备取11-羰基-β-乙酰乳香酸适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。

2.2.3供试品溶液的制备精密称取本品粉末0.5g，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理（500Ｗ，53ｋＨｚ）30min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.2.4阴性样品溶液的制备按照工艺制备缺乳香的阴性样品，然后照供试品溶液制备方法制备。

2.2.5干扰试验在上述色谱条件下，精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，阴性样品无干扰，见图2。

2.2.6　样品测定　取12个企业提供的17批样品，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定峰面积，计算含量，结果见表1。

3讨论

3.1薄层色谱法中展开剂的选择

考察了2个展开系统，分别为：a.硅胶g板，石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（19∶1）为展开剂；b.硅胶GF254板，石油醚（60～90℃）-环己烷-乙酸乙酯-甲酸（2∶6∶3∶0.5）为展开剂；结果表明a展开系统下，乳香特征点较多，难以区分出11-羰基-β-乙酰乳香酸特征斑点，故不予采纳。b展开系统主斑点Rf值适中，且不受显色剂影响，予以采纳。

3.2高效液相色谱法中色谱条件的选择

已有文献报道中HPLC法测定乳香酸类成分含量多使用Ｃ18色谱柱，且11-羰基-β-乙酰乳香酸的最大紫外吸收波长为249nm。本课题中考察了2种流动相，分别为：a.乙腈：四氢呋喃：0.1％甲酸（35∶25∶40）；b.乙腈：0.4％磷酸（90∶10）。结果表明，a种流动相中11-羰基-β-乙酰乳香酸的保留时间较长（36min左右），b种流动相中保留时间适中，分离效果好，无杂质干扰，予以采纳。

4结论

本文建立了西黄丸中11-羰基-β-乙酰乳香酸成分的定性定量方法，方法学验证表明本方法稳定，适用性良好。

本研究收集12个生产厂家的17批西黄丸样品，从定性测定结果来看，样品之间11-羰基-β-乙酰乳香酸百分含量差异明显；从定量测定结果来看，含量在0.27%-1.05%范围内波动。目前，这些差异与药效的相关性尚不明确，但其含量应可以部分反映药材的质量.

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