对于不同波长的光有不同的折射率,波长越短,介质的折射率越大,光程越大;流通池光程越大,生成的信号越高;增加光程,噪声提高幅度很小,信号强度提高,信噪比增加很大;同时,增加光程会使流通池体积增加,从而导致峰宽增加。
流通池光程
朗伯- 比尔定律指出流通池光程与吸光度之间存在线性关系。
吸光度=-logT=logI./I =e·c·d
其中
T 透光度,其定义强度比,即透过光强 I 与入射光强 I. 的比,
e 吸光系数,是给定物质在一组精确定义的条件(波长、溶剂、温度和其他参数)
下的特征
C 吸光物质的浓度(通常以 g/l 或 mg/l 为单位),
d 用于测量的流通池的光程。
在图2中,将光程从 6 mm 增加到 10 mm,噪声增加了不足 10%,而信号强度提高了 70%。
因此,流通池光程越长,生成的信号越高。尽管通常增加光程会使噪声提高的幅度很小,但信噪比确实会增大。
在图2中, 流通池体积:5 μl 光程;6 mm ,流通池体积:14 μl 光程;10mm , 流通池体积从 5 μ L 增加到了 14 μ L,通常这也会导致峰宽增加,这种情况不会影响梯度分离中的分离度。