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液相色谱（LC）
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主题：【求助】色谱出峰问题（已补图）

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guten
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发表于：2016/02/25 12:34:59 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近在做一个四个物质的液相－串联质谱分析方法开发。（新手，一直都没有做过系统的方法开发）
在这个方法里，为了简便，就使用乙腈溶解后直接进样，没有挥干复溶。
结果发现：
使用标准品，使用乙腈溶解后直接进样，在进样量为2uL时，可以比较好的分开，峰型都很好。保留时间都在4分钟左右。
但是在进样量为5uL时，发现其中两个物质会在开始时就有响应，会出现峰，之后还在该出峰都位置还是出峰。（即这两个物质分别出现两个峰，一个在很前端，1分钟左右，另一个正常）。好像是有一部分没有保留，就被冲出来了。（明天上图）
之后，没有试更大进样量。

请问为什么会分成两个峰？是因为溶剂效应么？因为我的色谱条件起始为水含量多。

在进样量较大的情况下，有什么方法可以解决一下么？

色谱条件为：
Waters XTerra RP18 柱 ( 3.5 um, 3.0 x 100 mm)；

柱温：35 oC；
进样量:  2 uL（或5uL）；
流速：0.3mL/min。
洗脱剂：A：0.1% 甲酸水溶液
              B：0.1% 甲酸乙腈
洗脱程序：10% B 保持0.5分钟，在2.5分钟内梯度升高B的含量至85%，保持2分钟，在0.5分钟的时间里恢复10%B并保持3.5分钟，以平衡色谱柱。
在这里，我们希望能够做个低浓度，所以图中的噪音比较高。一共四个物质，其中有一个物质出现了我说的现象。
一共两张大图，第一张为进样2uL，第二张为进样5uL。
每张大图有四张小图组成，其中第一个小图是四个物质（每个物质各至少有两组母子离子对）的所有母子离子对的色谱图，第二，三，四张小图是出问题的那个物质的三组母子离子对的相应色谱图。
忘记说了，四个物质里有一个不稳定，这也是不想挥干复溶的原因。

谢谢了！！！

附件：
5uL.pdf
2uL.pdf
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有水有渝
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2016/2/25 14:03:12 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能是溶剂效应，部分被样品溶液中的纯乙腈快速的带出色谱柱，部分被流动相带出色谱柱。为什么不用流动相当溶剂呢？
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guten
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2016/2/25 17:32:21 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
可能是溶剂效应，部分被样品溶液中的纯乙腈快速的带出色谱柱，部分被流动相带出色谱柱。为什么不用流动相当溶剂呢？


谢谢！
就是怕麻烦了，提取时就想用乙腈就完了。省时间。
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有水有渝
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2016/2/25 17:46:20 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 guten(v2683318) 发表:
谢谢！
就是怕麻烦了，提取时就想用乙腈就完了。省时间。
提取液浓度已经很低了吗，如果还可以稀释，稀释剂直接用0.1% 甲酸水溶液，这样就不用把乙腈吹干再复溶了。
该帖子作者被版主 bingwang228加 2积分， 2经验，加分理由：持续应助
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guten
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2016/2/25 18:15:52 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
提取液浓度已经很低了吗，如果还可以稀释，稀释剂直接用0.1% 甲酸水溶液，这样就不用把乙腈吹干再复溶了。


谢谢！
打算这样试试。但LOD有要求，也不太敢稀释太多。
还有就是到时使用血液样品，每个样品里的水不太一样。
所以还是想搞清楚具体什么原因，以避免后面出现溶剂效应，定量不准，做了无用功。
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2016/2/25 18:19:07 Last edit by v2683318
夏天的雪
bingwang228
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2016/2/25 19:29:08 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
上个图吧，如果是溶剂效应尽量将乙腈吹干然后用流动相溶解
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有水有渝
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2016/2/26 8:37:11 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 guten(v2683318) 发表:
谢谢！
打算这样试试。但LOD有要求，也不太敢稀释太多。
还有就是到时使用血液样品，每个样品里的水不太一样。
所以还是想搞清楚具体什么原因，以避免后面出现溶剂效应，定量不准，做了无用功。
溶剂组分比例相差不超过10%应该对结果影响不大，当然最终结果都要看验证，不太敢稀释太多，那就把乙腈吹到一程度，至少不需要完全吹干，节省时间
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2016/2/26 8:37:26 Last edit by xky0230699
guten
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2016/2/26 16:46:09 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
上个图吧，如果是溶剂效应尽量将乙腈吹干然后用流动相溶解


已补图，谢谢！
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guten
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2016/2/26 16:47:14 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
溶剂组分比例相差不超过10%应该对结果影响不大，当然最终结果都要看验证，不太敢稀释太多，那就把乙腈吹到一程度，至少不需要完全吹干，节省时间


这样的话，定量怎么办？
原帖里忘记提了，四个物质里还有一个还不稳定，所以不想弄挥干的步骤。
谢谢！
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2016/2/26 16:50:00 Last edit by v2683318
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