主题：【原创】关于方法验证的若干问题

    周末在色谱之家微信群里和大家一起讨论了关于方法验证所需项目的问题，现在根据讨论内容和本人日常工作实际操作进行总结。
    方法验证前需确定待验证的方法，包括目标物、色谱柱、检测器、流动相、色谱条件等。
    （1）已知方法检出限时，应根据称样量、稀释倍数、定容体积确定仪器检出限，并根据仪器检出限选择标准工作曲线的线性范围，一般线性低点在仪器检出限或1/2仪器检出限，线性可按照1:2:4:8:10设置。
    阴性样品，标准物质加入应按照方法检出限的2-10倍加标，条件允许应进行检出限加标，若目标物有限值应做限值加标。每个梯度的加标应保证至少6个平行，既6个阴性样品、（6个方法检出限加标，2个梯度共12个方法检出限2-10倍加标，3个梯度可选两组），6个限值加标（可选）。需要总结的数据包括方法方法检出限加标信噪比（应大于3），每个梯度的RSD（根据加标量确定范围）和平均回收率（80-120%），标准物质重复6针测定保留时间RSD和峰面积RSD，分离度。
    阳性样品，标准物质加入应按照测定样品值得80%和120%加标，每个梯度6个平行，既6个阳性性样品、12个加标样品，需要总结的数据同上，方法检出限应按照标准物质仪器检出限折回收计算值与样品值计算值比对，选择合适的作为方法检出限。如果需要，选择阴性样品加标，按照阴性样品操作验证。
    （2）未知检出限的时，若给出线性，应按照线性低点、百分百回收加标，计算信噪比，若大于3，则根据实际数值降低加标量，直至信噪比3-10之间为止。若未给出线性，应稀释走标，标准品信噪比10、百分百回收加标，计算信噪比，若大于3，则根据实际数值降低加标量，直至信噪比3-10之间为止。然后在同已知检出限进行验证。
附：浓度与精密度的关系(理论上浓度越低，RSD允许越大)  PS：实际回收率，浓度越低，可接受范围越高，比如1ppb，可接受的回收再40%-120%之间。
浓度      RSD（%）
100%        1.3
10%          2.7
1%            2.8
0.1%        3.7
100ppm  5.3
10ppm    7.3
1ppm      11
100ppb    15
10ppb      21
1ppb        30